高通量转录组文库构建方法.pdf

本发明公开了一种高通量转录组文库构建方法，包括以下步骤：1)、从总RNA中分离mRNA；2)、将mRNA打碎成片段；3)、对片段化后的mRNA加poly？A尾：利用polyA聚合酶以及ATP，在片段化的mRNA的3’端加上碱基A；4)、逆转录生成单链cDNA：设计一条带有polyT以及两段特异性序列的引物，与mRNA的polyA结合，并逆转录，加热变性后生成单链cDNA；5)、单链cDNA的环化：在单链DNA连接酶的作用下，单链cDNA环化，生成一个环；6)、PCR富集，文库构建：利用环上的两段特异性序列

2023-10-12

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一种简化DNA甲基化文库及转录组共测序文库的构建方法.pdf

本发明公开了一种简化DNA甲基化文库及转录组共测序文库的构建方法，包括如下步骤：步骤一，细胞样本准备；步骤二，将gDNA和mRNA分离；步骤三，将mRNA反转录成cDNA，再对cDNA进行文库富集和定量；步骤四，cDNA采用转座法进行文库构建后再PCR孵育；步骤五，准备测序文库；步骤六，限制性内切酶消化；步骤七，末端修复和加碱基“A”；步骤八，采用DNA连接酶连接甲基化接头；步骤九，亚硫酸氢盐转化甲基化文库；步骤十，甲基化文库的PCR富集；步骤十一，准备RRBS测序文库；本发明实现了对同一单细胞进行甲基化

2023-08-04

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一种基于全转录组高通量测序构建基因调控网络的方法.pdf

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种基于全转录组高通量测序构建基因调控网络的方法。在全转录组高通量测序数据的基础上，通过对差异表达的基因、lncRNA、circRNA及miRNA的筛选，以及基因、lncRNA与circRNA的共表达分析和miRNA结合靶点预测，构建疾病相关的竞争性内源RNA调控网络，根据随机游走算法筛选出调控网络中的关键基因，并通过通路富集分析确定关键基因显著富集的通路，结合通路的基因调控关系，分析关键基因在调控疾病过程中的生物学机理。本发明提供的疾病相关关键基因的鉴定及其调控网络的

2024-01-10

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转录组高通量测序.doc

转录组高通量测序2010-11-2209:48（第二代高通量测序技术-454）转录组即特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和，是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是，转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下，其基因表达情况是不完全相同的。罗氏GS-FLX-Titanium第二代高通量测序仪平均读长超过400bp，在测序读长上遥遥领先于其它第二代高通量测序仪，使其成为转录组学研究的首选测序平台，已被广泛应用于基础研究、临床诊断和药物研发等领域。

2024-08-19

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一种高通量简化基因组测序文库的构建方法.pdf

本发明提供了一种高通量简化基因组测序文库的构建方法，用限制性内切酶对不同样品的基因组DNA酶切，获得5’末端具有磷酸化修饰的平末端DNA片段；3’末端添加碱基A，将不同样品的具有5’磷酸化和3’粘性末端A的DNA片段与含有不同条形码序列的接头相连，连接产物PCR，扩增产物纯化、混合，再进行低循环PCR扩增，获得接头和接头二聚体比例大幅减少的目的片段扩增产物；再分离纯化，纯化产物构成高通量简化基因组测序文库。该方法的优点在于通量高、成本低，产生的文库测序质量高，在实现高通量SNP检测及标记开发、遗传图谱绘制

2024-01-10

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