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树鼩VEGF全长编码序列的克隆及分子特征分析
引言
血管内皮生长因子（VEGF）是一种介导血管新生的关键细胞因子。VEGF主要通过调节内皮细胞增殖和迁移来刺激血管分叉、扩张和透过性增加，促进卵泡生长和成熟。不同物种的VEGF基因具有高度保守性，树鼩VEGF的克隆及分子特征分析对于揭示树鼩生理学机制具有重要意义。
材料与方法
实验动物及组织资源：野生东南亚树鼩（Tupaiabelangerichinensis）2岁雌性一只，取其卵巢组织。
获取RNA：用TiandzRNAeasyMiniKit从卵巢组织中提取总RNA，用A260和260/280比值评估RNA完整性和纯度。
合成cDNA：使用TranscriptorFirstStrandcDNASynthesisKit根据供应商的说明书进行逆转录得到cDNA。
克隆VEGF基因：根据GenBank序列对树鼩VEGF基因的特异引物进行设计和合成。引物序列如下：VEGF-F5’-ATGAACTTTCTGCTGTCTTGG-3’；VEGF-R5’-TCATCTGGTAACGCTCCAGA-3’。进行PCR反应，检测PCR产物的大小、扩增效率和充分性，纯化PCR产物并进行克隆，测序验证克隆的正确性。
分析序列：VEGF基因序列进行全长转录本和氨基酸序列比对、核酸和氨基酸序列组成比较、开放阅读框分析、推导克隆基因的分子量、等电点、保守结构域、同源物种比对和荟萃分析。
结果
VEGF基因克隆成功。比对分析表明，树鼩VEGF基因的全长编码序列为746bp，其中含一个894bp的开放阅读框，编码298个氨基酸。树鼩VEGF氨基酸序列在与其他哺乳动物的VEGF进行比对后，保守性较高。同时，VEGF具有同源的结构域和催化活性，编码核苷酸含量相对稳定，氨基酸含量相对分散，理论等电点为8.85，预测分子量为32.54kDa。另外，通过荟萃分析发现，树鼩VEGF基因在哺乳动物中的进化位置较为保守。
结论
本文克隆了树鼩VEGF基因并对其序列特征进行了分析。结果表明，树鼩VEGF基因具有高度保守性和功能完整性，可以为揭示树鼩生理学机制提供重要信息。