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高效液相色谱法测定乳制品中纳他霉素分析方法的改进
摘要
乳制品中残留纳他霉素对人体健康存在潜在风险，因此需要建立一种准确、快速、简便的分析方法。本文提出了一种改进的高效液相色谱法（HPLC），通过优化样品前处理、色谱条件和检测参数等步骤，建立了一种稳定、可靠、灵敏的方法。结果表明，该方法具有较高的准确性和精确度，并能够满足国家标准的要求。该方法适用于乳制品中残留纳他霉素的分析和监测。
关键词：纳他霉素；高效液相色谱法；乳制品
Abstract
Theresidualnataomycinindairyproductsmayposepotentialriskstohumanhealth,soitisnecessarytoestablishanaccurate,fastandsimpleanalysismethod.Inthispaper,animprovedhighperformanceliquidchromatography(HPLC)methodwasproposed.Byoptimizingthesamplepretreatment,chromatographicconditionsanddetectionparameters,astable,reliableandsensitivemethodwasestablished.Theresultsshowedthatthemethodhadhighaccuracyandprecision,andcouldmeettherequirementsofnationalstandards.Themethodissuitablefortheanalysisandmonitoringofresidualnataomycinindairyproducts.
Keywords:nataomycin;highperformanceliquidchromatography;dairyproducts
引言
纳他霉素作为一种广谱抗真菌药物，在食品工业中广泛应用，可用于防止在乳制品中的真菌和酵母的生长，从而延长产品的保鲜期。但是，过量使用或误用纳他霉素会导致其残留在食品中，对人体健康造成潜在危害。因此，对纳他霉素的残留安全性进行评价并建立有效的检测方法是非常重要的。
传统的纳他霉素检测方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、毛细管电泳法等。其中，高效液相色谱法具有压力高、分离效率高、分离速度快等优点，已经成为乳制品中纳他霉素检测的主要手段之一。但是，该方法中存在一些问题，如操作繁琐、分离不彻底、回收率低等，影响了其在实际应用中的准确性和稳定性。
为此，本文从样品前处理、色谱条件和检测参数等方面入手，对高效液相色谱法的方法进行了改进，旨在建立一种准确、快速、简便的检测方法，以便于乳制品中纳他霉素的安全监测。
材料与方法
仪器和试剂
Agilent1260InfinityHPLC系统（美国艾捷伦科技有限公司）；InertsilODS-3柱（4.6mm×250mm，5μm，GLSciencesInc.）；纳他霉素（纯度>98%，药典级，某国药物研究所）；甲醇（HPLC级）；乙腈（HPLC级）；磷酸二氢钾（AR级）；硫酸（AR级）；氯仿（AR级）；一水合硼氢化钠（AR级）；乳制品样品。
样品前处理
取适量样品（1g），加入30mL乙腈水溶液（70/30，V/V），使用超声波水浴（设置功率500W，频率40kHz）混匀离心（10000rpm，5min）后过滤，获得滤液。
色谱条件
色谱柱：InertsilODS-3柱（4.6mm×250mm，5μm）。
流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（70/30，V/V），pH为4.0
流速：1.0mL/min
检测波长：275nm
检测参数
线性范围：0.1-50μg/mL
加样量：20μL
结果与讨论
优化样品前处理
纳他霉素在乳制品中的残留量较低，同时样品中包含大量的干扰性物质，如蛋白质和脂肪，因此需要对样品进行复杂的预处理。传统的方法通常采用三氯乙酸或醋酸乙酯等强极性溶剂进行提取，但该方法操作繁琐，且影响分离效率，回收率低。本文加入一定量的乙腈形成水/有机混合溶液，使蛋白质和脂肪在乙腈中迅速沉淀，从而保留了纳他霉素，并获得了较高的回收率。
优化色谱条件
针对传统的高效液相色谱法分离效果不佳的问题，本文选用了一种氮芳基二氧杂环己烷（NADH）作为添加剂，采用甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（70/30，V/V）作为流动相，pH为4.0。结果表明，添加NADH后，纳他霉素的分离度得到了显著提高，峰形较为对称，同时对溶剂极性和属性选择要求较低，dosage-effect也非常稳定。
检测参数优化
本文对检测方法的参数进行了优化，结果发现，最优波长为