麦麸中多酚氧化酶的分离纯化及其性质的初步研究.docx

麦麸中多酚氧化酶的分离纯化及其性质的初步研究
麦麸中多酚氧化酶的分离纯化及其性质的初步研究
摘要：
多酚氧化酶（Polyphenoloxidase,PPO）是一种广泛存在于植物和动物中的酶，可催化多酚类物质的氧化反应。本研究旨在从麦麸中分离纯化多酚氧化酶，并对其性质进行初步研究。
麦麸样品通过水浸提取得到麦麸提取液，通过过滤去除固体物质后进行沉淀处理。得到的沉淀物在25°C下进行酒精沉淀，并采用50mMTris-HCl缓冲液对其进行溶解。经过高速离心后，得到的沉淀物经过超声分散打散，最终得到多酚氧化酶的纯化产物。
纯化后的多酚氧化酶经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，结果显示其蛋白质电泳带主要分布在50-60kDa处，与多酚氧化酶的理论分子量相符。具有较浓的活性带和较弱的电泳带表明纯化产物中已获得较高纯度的多酚氧化酶。
针对纯化多酚氧化酶的性质研究发现，在pH6.0的缓冲液中，多酚氧化酶的最适温度为30°C。随着温度升高或降低，酶的活性会逐渐下降。多酚氧化酶对酚类底物的亲和性较高，咖啡酚、儿茶酚等底物的反应速率常数比较大；而对脱氧肾上腺素、儿茶酚胺等类似物质的底物反应速率常数较小，表明多酚氧化酶对底物的选择性较强。
然而，在我们的研究中发现，多酚氧化酶对氧化反应的催化活性表现出一定的细胞稳定性。在高浓度过氧化氢的存在下，多酚氧化酶仍能保持较高的催化活性，这可能与其酸性氨基酸残基的存在有关。
综上所述，本研究成功从麦麸中分离纯化得到多酚氧化酶，并初步研究了其性质。这对更深入了解多酚氧化酶的催化机制以及其在食品加工和抗氧化领域的应用具有一定的意义。
关键词：麦麸；多酚氧化酶；分离纯化；性质研究
Abstract:
Polyphenoloxidase(PPO)isanenzymethatiswidelypresentinplantsandanimalsandcatalyzestheoxidationreactionofpolyphenolicsubstances.ThisstudyaimstoisolateandpurifyPPOfromwheatbranandinvestigateitsproperties.
Thewheatbransamplewasextractedwithwatertoobtainthewheatbranextract,whichwasthentreatedwithprecipitationafterremovingsolidmaterialsthroughfiltration.Theobtainedprecipitatewasalcohol-precipitatedat25°Canddissolvedwith50mMTris-HClbuffer.Afterhigh-speedcentrifugation,theobtainedprecipitatewasdispersedanddisruptedbyultrasoundtoobtainthepurifiedproductofPPO.
ThepurifiedPPOwasanalyzedbypolyacrylamidegelelectrophoresis,andtheresultsshowedthattheproteinbandsofPPOweremainlydistributedataround50-60kDa,whichisconsistentwiththetheoreticalmolecularweightofPPO.ThepresenceofastrongactivitybandandaweakelectrophoreticbandindicatedthatahighpurityofPPOwasobtainedinthepurifiedproduct.
ThestudyofthepropertiesofpurifiedPPOrevealedthattheoptimaltemperatureofPPOwas30°CinthepH6.0buffer.Theenzymeactivitygraduallydecreasedwithincreasingordecreasingtemperature.PPOhadahighaffinityforphenolicsubstrates,andthereactionrateconstantsofsubstratessuchascaffeicacidandcatecholwererelativelylarge.However,thereactionrateconstantsofsubstratessimilartodopamineandcatecholaminewererelativelysmall,indicatingstrong