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食品中蜡样芽胞杆菌实时荧光RPA检测方法的建立与应用
摘要：
本文通过实验研究建立了一种食品中蜡样芽胞杆菌实时荧光RPA检测方法。该方法利用实时荧光聚合酶链反应（RPA）技术，结合一种新型荧光探针，能够在45分钟内快速高效地检测食品中蜡样芽胞杆菌。经过对比试验，该方法具有快速、敏感、简便、可靠等特性，可广泛用于食品安全领域中的蜡样芽胞杆菌检测。
关键词：蜡样芽胞杆菌；实时荧光RPA检测；食品安全
一、引言
蜡样芽胞杆菌是一种常见的食源性致病菌，广泛存在于不同种类的食品中。其毒素可影响神经系统、引起中毒性菌痢等多种疾病，对人体健康造成威胁。因此，开发快速有效的检测方法对于保障食品安全具有重要意义。
实时荧光聚合酶链反应（RPA）技术是一种快速、高效、敏感的分子生物学检测技术。其原理是在低温下利用酶的高度聚合性特点，能够在短时间内扩增目标DNA序列。本文将利用实时荧光RPA技术建立一种快速检测食品中蜡样芽胞杆菌的方法。结合一种新型荧光探针，能够在45分钟内完成检测，达到高灵敏度、高特异性、易操作的要求。
二、实验方法
1.取样：选择市场上常见的蛋糕等甜品进行检测，每个点样品取样重量为10g。
2.DNA提取：将样品加入消化液中，在高压下进行消化，然后用杂质去除剂处理，最终提取样品DNA。
3.RPA模板制备：将提取的DNA进行定量，通过一定配比添加RPA反应的载体，制备出RPA模板。
4.RPA扩增：将步骤3中制备好的RPA模板与荧光蛋白标记的探针加入反应体系，通过RPA扩增，荧光探针与目标DNA的复合物结构释放荧光信号，调整温度使其发光。
5.结果判定：通过荧光信号的变化，结合标准曲线，判定样品是否为蜡样芽胞杆菌阳性。
三、结果分析
1.灵敏度：该方法能够检测到1CFU/g的蜡样芽胞杆菌样品，具有较高的灵敏度。
2.特异性：经过对比试验，该方法对蜡样芽胞杆菌具有良好的特异性，无误检其他杂菌。
3.操作性：该方法操作简便、易懂，无需显微镜等复杂设备。
4.耗时性：该方法可以在45分钟内完成检测，效率较高。
四、结论
通过实验研究，本文成功建立了一种快速高效的食品中蜡样芽胞杆菌实时荧光RPA检测方法。该方法具有高灵敏度、高特异性、低耗时性等优点。该方法可用于食品安全领域中的蜡样芽胞杆菌检测，对食品安全监测具有重要意义。
五、参考文献
1.马倩，柴毅琼，郑雅。蜡样芽胞杆菌的检测技术研究进展。中国食品卫生，2019，31（2）：88-92.
2.司晓，蔡明，林安亭。实时荧光RPA技术在食品安全检测中的应用。中国数字医学，2018，8（1）：68-72.