微生物的计数及分离纯化.pptx

微生物的计数及分离纯化微生物的计数二、实验原理认识显微镜镜筒：
单筒：直立式（长度为160mm）、后倾式（倾斜45°）
双筒：倾斜式
转换器：3~5个孔
载物台：方形、圆形
中央有一通光孔，孔的两侧装有标本夹，还有移动器（其上有刻度标尺）
调节器（粗、细）：
镜壁上：升降镜壁调焦
镜壁下：升降载物台调焦
显微镜的使用对光观察如果粗准焦螺旋调节旋钮旋得太快，超过焦点，
需要将粗准焦螺旋调到最低，重新寻找焦点

观察时双眼睁开（不疲劳），若是单筒显微镜也
用左眼观察，便于绘图。
高倍镜的操作油镜的操作整理与安放使用注意事项血球计数板

是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
血球计数板
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每mL菌液（或每g样品）中微生物细胞的数量。
平板计数法三、实验器皿与材料四、实验步骤3、静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
5、对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次，求出每一个小格中细胞平均数（N），按公式计算出每ml（g）菌悬液所含酵母菌细胞数量。
注意事项实验步骤计数注意注意微生物的分离纯化一、实验目的二、实验原理
倒平板→制备梯度稀释液→划线法（或涂布法）→培养→挑单菌落→保存。

三、仪器与材料四、实验步骤操作方法：右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用右手手掌和小指将瓶塞轻轻地拨出，瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一条稍大于瓶口的缝隙，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。3、做分标志区
在皿底用记号划分成4个不同面积的区域，使A<B<C<D，且各区的夹角应为120°左右，以便使D区与A区所划出的线条相平行、美观。（如图）
4、划线操作
1)挑取菌样：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌试样。

2)先划A区：将平板倒置于酒精灯火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，并让平板面向火焰。右手持含菌的接种环，先在A区轻巧地划3~4条连续的平行线当作初步稀释的菌源。烧去接种环上的残余菌样。
3)划其余区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转至划线位置，把接种环通过A区(菌源区)而移至B区，随即在B区轻巧地划上6~7条致密的平行线，接着再以同样的操作在C区和D区划上更多的平行线，并使D区的线条与A区平行(但不能与A区或B区的线条接触！)，最后，将左手所持皿底放回皿盖中。烧去接种环上的残菌。

5、恒温培养将划线后的平板至37℃倒置培养2~3天
6、挑单菌落良好的结果应在C区出现部分单菌落，而在D区出现较多独立分布的单菌落

7、然后从典型的单菌落中挑取少量菌体至试管斜面，经培养后即为初步分离的纯种。然后从典型的单菌落中挑取少量菌体至试管斜面，经培养后即为初步分离的纯种。

8、清洗培养皿将废弃的带菌平板作煮沸杀菌后进行清洗、晾干。

9、保存菌种。斜面接种接种的步骤4)拔管塞用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。见图所示。

5)接种环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。
6)取菌待接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。
7)接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。接种的步骤操作图五、注意事项菌种的保藏低温定期移植保藏法方法与步骤方法与步骤方法与步骤液体石蜡保藏法方法与步骤方法与步骤注意事项其他方法与适用范围