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环介导恒温扩增快速检测植物油中掺假地沟油方法的建立
随着人们生活水平的提高，植物油成为人们饮食中必不可少的食品。然而，由于植物油价格较高，有些不法商家为了获得更高的利润，会掺假地沟油、动物油等其他低成本的油脂。这些掺假行为不仅影响了消费者的健康，还损害了植物油生产企业的利益。因此，建立一种快速、准确的植物油中掺假地沟油的检测方法变得至关重要。
近年来，聚合酶链式反应（PCR）技术因其高灵敏度、快速、简便等优点被广泛应用于食品安全领域的检测中。PCR技术的主要原理是通过DNA模板和引物，在体外扩增目标DNA片段，并通过计量方法检测PCR扩增产物，从而实现对样品中目标DNA的敏感、特异性、快速检测。
由于地沟油和植物油基质差异明显，因此，建立鉴定地沟油的外源性掺入物资DNA的PCR方法成为解决这一问题的关键。本研究通过设计特异性引物，建立环介导恒温扩增的方法，实现对掺假地沟油的一步快速检测。
试验方法：
1.样品测定
选取10种常用植物油和地沟油作为样品，其中第1至第10号样品为纯品，第11号样品为地沟油。将10μL样品加入50μL试剂管中，离心10秒钟。取上清液进行后续实验操作。
2.DNA提取和纯化
将上清液加入到1.5mL离心管中，加入1.2倍体积的冰冻离解液（4°C）室温放置10分钟，并离心10分钟。取上清液转移到新1.5mL离心管中，加入倍体积的800毫摩尔环境破裂试剂盐、一定比例的聚乙烯醇（PEG）和75%乙醇，混匀后放置室温下搅拌10分钟。离心10分钟后，将上清液去除，加入500μL特制洗涤缓冲液，室温搅拌5分钟。离心10分钟后，取上清液转移到新1.5mL离心管中，加入50μLDEPC水，10分钟加热95°C，冰镇5分钟。离心10秒后，取上清液用紫外检测，获得提取的DNA。
3.PCR反应
将5μL模板DNA提取物加入25μL反应体系中，反应体系成分如下：2.5μL10倍PCR缓冲液、1μL4个dNTP混合液、1μLMgCl2、0.3μLTaq酶、0.25μL每个引物和17.95μLDEPC水。将反应管轻轻摇晃，然后反应2分钟。按照以下程序进行PCR扩增：持续5分钟的94°C的变性，在55°C下变性45秒，在72°C下延伸2分钟，共进行30个循环。扩增结束后将PCR产物进行电泳分析。
4.结果分析
PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶上进行了电泳分析，通过紫外扫描和对照检测，确定PCR扩增产物结果。
结果显示，正常的植物油样品未显示出PCR扩增产物，而掺入地沟油的植物油样品中，能够检测到特异性PCR扩增产物，可以快速准确地检测出植物油样品中的地沟油掺入情况。
本研究建立的环介导恒温扩增的方法实现了对植物油中掺假地沟油的快速检测。该方法的优点在于不需要DNA分离纯化就可直接进行PCR扩增，减少了操作步骤和提取DNA的时间，整个实验过程时间大幅缩短。同时，该方法的灵敏度和特异性较高，可有效区分不同的样品。因此，该方法为植物油生产企业提供了一种快速、准确、有效的检测方法，可以有效避免掺假地沟油等低成本油脂的掺入，保证消费者的健康和企业的利益。