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临床检测样本RNA提取方法的比较研究

动物医学院专业学生苏华健

指导教师周斌

摘要：选择市售的三种细胞裂解液（RNAisoPlus、TRNzolPlus和RNAOUT）和两种DNA\RNA
共提试剂盒（柱式病毒RNA-DNA双提试剂盒、QeasyTM快速DNA/RNA共提试剂盒），分
别对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和乙型脑炎病毒（JEV）三种
病毒RNA进行提取，通过琼脂糖凝胶电泳和Real-timePCR间接评价所提取的RNA质量。
结果表明：对于琼脂糖凝胶电泳，上述三种细胞裂解液和QeasyTM快速DNA/RNA共提试
剂盒对应的组均可见清晰且高亮的条带，可用于临床RNA病毒检测以及定性分析。对于
Real-timePCR，QeasyTM快速DNA/RNA共提试剂盒CT值最低，RNAisoPlus、TRNzolPlus
两种细胞裂解液其次，以上三种试剂可用于临床RNA病毒检测以及定量分析。
关键词：RNA；提取方法；比较；临床

ComparisonofMethodsofclinicaltestsamplesRNAextraction

StudentmajoringinveterinarymedicineSuHuajian

TutorZhouBin

Abstract：Threecommerciallyavailablecelllysates(RNAisoPlus,TRNzolPlusandRNAOUT)
andtwoDNA/RNAco-kits(LC-DNAdouble-kit,QeasyTMrapidDNA/RNAco-kit)were
selectedtoextractthreeanimalRNAviruses（PRRSV,CSFVandJEV）.TheRNAqualitywas
evaluatedindirectlybyagarosegelelectrophoresisandReal-timePCR.Theresultshows,for
agarosegelelectrophoresis,theclearlyandhighlightbandscanbeseenabovethegroupsofthe
threecelllysatesandQeasyTMrapidDNA/RNAco-kit,whichcanbeusedforclinicalRNAvirus
detectionandqualitativeanalysis.ForReal-timePCR,theCTvalueoftheQeasyTMrapidDNA/
RNAco-kitgroupisthelowest,andthetwocelllysatesgroups(RNAisoPlus,TRNzolPlus)
followed.TheabovethreereagentscanbeusedforclinicalRNAvirusdetectionandquantitative
analysis.
Keywords:RNA；ExtractionMethod；Comparison；Clinical

RNA是生物体重要的遗传物质[1]。近年来，越来越多的科研结果表明，RNA
在生命进程中的作用远不止于此，在2002年度Science评选的10大科学成就中
RNA名列榜首。
RNA分子提取是生物学研究中的一项基本内容，是进行基因表达分析的基
础[2]。对于cDNA文库构建、荧光定量PCR、RT-PCR、Northern杂交等下游分子
生物学实验来说，都需要质量好的，完整性高的RNA[3]。
在所有RNA试验中最关键的因素是分离得到全长RNA。分离出纯度高且完
整的RNA是进行基因表达分析及RNA结构功能研究的基础。在所有RNA实验
中，最关键的步骤是分离得到纯度高且完整的RNA。，从组织细胞中分离纯粹完
整的RNA对于分子克隆和基因表达分析等试验是至关重要的[4,5]
Chomczyski和Sacchi第一次提出了用异硫氰酸胍法提取细胞内的RNA[6]，
使得RNA的提取过程变得简便快捷。常见的RNA提取方法有强变性剂法[7]、
CTAB法[8]、SDS-Phenol法[9]以及热硼酸法[10]等。在商品化的今天，国内外生物
试剂公司研发出了许多RNA提取试剂盒。比如Takara公司的RNAisoPlus；
Invitrogen公司的Trizol总RNA提取试剂盒以及PureLink™RNAMiniKit；上
海生工的UNlQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒；Omega公司的RNA小量
提取试剂盒（BacteriaRNAkit）以及高纯RNA抽提试剂盒（HPtotalRNAkit）；
Qiagen公司的RNeasyProte