临床检测样本RNA提取方法的比较研究31.docx

临床检测样本RNA提取方法的比较研究摘要：选择市售的三种细胞裂解液（LiaisonPlus、TrollPlus和RNAOUT）和两种DNA\RNA共提试剂盒（柱式病毒DHARNA双提试剂盒、Queasy快速DNA/RNA共提试剂盒），分别对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和乙型脑炎病毒（JEV）三种病毒RNA进行提取，通过琼脂糖凝胶电泳和Real-timePCR间接评价所提取的RNA质量。结果表明：对于琼脂糖凝胶电泳，上述三种细胞裂解液和Queasy快速DNA/RNA共提试剂盒对应的组均可见清晰且高亮的条带，可用于临床RNA病毒检测以及定性分析。对于Real-timePCR，Queasy快速DNA/RNA共提试剂盒CT值最低，LiaisonPlus、TrollPlus两种细胞裂解液其次，以上三种试剂可用于临床RNA病毒检测以及定量分析。关键词：RNA；提取方法；比较；临床ComparisonofMethodsofclinicaltestsamplesRNAextractionAbstract：Threecommerciallyavailablecellsates(LiaisonPlus,TrollPlusandRNAOUT)andtwoDNA/RNAco-kits(ALCMENAdouble-kit,QueasyrapidDNA/RNAco-kit)wereselectedtoextractthreeanimalRNAviruses（PRRSV,CSFVandJEV）.TheRNAqualitywasevaluatedindirectlybyagaricgelelectroplateandReal-timePCR.Theresultshows,foragaricgelelectroplate,theclearlyandhighlightbandscanbeseenabovethegroupsofthethreecellsatesandQueasyrapidDNA/RNAco-kit,whichcanbeusedforclinicalRNAvirusdetectionandqualitativeanalysis.ForReal-timePCR,theCTvalueoftheQueasyrapidDNA/RNAco-kitgroupisthelowest,andthetwocellsatesgroups(LiaisonPlus,TrollPlus)followed.TheabovethreereagentscanbeusedforclinicalRNAvirusdetectionandquantitativeanalysis.Keywords:RNA；ExtractionMethod；Comparison；ClinicalRNA是生物体重要的遗传物质[1]。近年来，越来越多的科研结果表明，RNA在生命进程中的作用远不止于此，在2002年度Science评选的10大科学成就中RNA名列榜首。RNA分子提取是生物学研究中的一项基本内容，是进行基因表达分析的基础[2]。对于DNA文库构建、荧光定量PCR、CRT、Northern杂交等下游分子生物学实验来说，都需要质量好的，完整性高的RNA[3]。在所有RNA试验中最关键的因素是分离得到全长RNA。分离出纯度高且完整的RNA是进行基因表达分析及RNA结构功能研究的基础。在所有RNA实验中，最关键的步骤是分离得到纯度高且完整的RNA。，从组织细胞中分离纯粹完整的RNA对于分子克隆和基因表达分析等试验是至关重要的[4,5]Chomsky和Sacchi第一次提出了用异硫氰酸胍法提取细胞内的RNA[6]，使得RNA的提取过程变得简便快捷。常见的RNA提取方法有强变性剂法[7]、CTAB法[8]、ADS-Phenol法[9]以及热硼酸法[10]等。在商品化的今天，国内外生物试剂公司研发出了许多RNA提取试剂盒。比如Tamara公司的LiaisonPlus；Inviting公司的Tripoli总RNA提取试剂盒以及PureLink™RNAMiniKit；上海生工的UNlQ-10