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现代医学仪器血细胞分析仪概述血细胞分析仪概述血细胞分析仪概述血细胞分析仪概述白细胞分类计数 (DifferentialLeukocyteCellCount) 检测白细胞从二分群、三分群发展到五分群 除了体积测量之外增加了多种手段(联合检测法) 激光散射、激光激发荧光检测法 射频(高频)传导检测法 特殊溶血剂检测法 多角度激光、偏振光散射检测法 细胞化学染色检测法 在实际仪器中至少采用两种以上方法联合对 白细胞进行五分类。血细胞分析仪分型 小孔电阻抗法是利用血细胞混悬液中血细胞的电阻 大于电解液溶液(稀释液)电阻的特性,当血细胞 通过小孔时引起小孔两端电阻抗增大的原理而进行 血细胞计数和体积测定。 小孔电阻抗法能够进行白细胞、红细胞、血小板计 数及体积的测定。 小孔电阻抗法在对白细胞分类上只能将白细胞按体 积大小分为三个亚群,故分析精度较差。(164页) 采用Coulter原理, 即小孔电阻抗法 装有宝石小孔的 小孔管 置与小孔管内外 的铂金电极 两电极间的恒流电源 小孔上端的恒定负压 测定原理(Principle) 电阻抗法(小孔阻抗法、白细胞三分群)测定原理(Principle) 由检测器产生的脉冲信号经计算机处理后以体积 直方图显示。直方图可以显示特定细胞群中的细 胞体积和细胞分布情况。(164页) 由检测器产生的脉冲信号经计算机处理后以体积 直方图显示。直方图可以显示特定细胞群中的细 胞体积和细胞分布情况。 在进行血细胞分析时,白细胞和血红蛋白为一个 检测通道(小孔直径为100µm);红细胞和血小板 为一个检测通道(小孔直径为70µm)。单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞 MonocyteEosinophilBasophil (统称为中间细胞)体积为90-160fL 白细胞的计数与分类:(白细胞/血红蛋白通道) 血液样品+稀释液+溶血剂白细胞的计数与分类 血红蛋白测定:(白细胞/血红蛋白通道) 血液样品+稀释液+溶血剂+转化剂氰化血红蛋白 氰化血红蛋白浓度∝血红蛋白浓度比色法测量 由于血小板的体积小于红细胞,两者在同一测量通道 中进行。 由于血液中红细胞的总数远大于白细胞,检测样品经 二次稀释后直接进入小孔计数。 检测结果同样以直方图形式显示。 小孔电阻抗法不能 对红细胞中的网织 红细胞进行测量。 单纯依靠细胞体积大小来进行白细胞五分类是难 以做到的。必须采用一些其他检测手段联合应用来进 行白细胞五分类。(联合检测型)常用方法有: 高频电磁波(或称射频)传导法 细胞化学染色法 特殊溶血剂法 激光散射法(测不同角度的散射及激发光) 其白细胞总数、红细胞、血小板及血红蛋白的测 定方法仍基本沿用“三分类”型分析仪的方法。 绝大多数五分类血细胞分析仪在检测通道上都 采用了流式细胞分析技术。 流式细胞分析技术的检测光路可分为鞘流通道、 激发光源(多为激光)、散射光检测、吸收光检测、 荧光检测等几个方面。 在白细胞五分类型血液分析仪中对网织红细胞 一般也采用单独的激光流式细胞分析通道进行 检测。 五分类血细胞 分析仪白细胞 分类结果均采 用散点图的形 式来显示。 红白细胞总数 血小板仍采用 直方图显示。 联合型检测法基本原理 图中纵坐标为 体积;横坐标为 吸光度。 各种不同类型 的白细胞根据 其体积与吸光 度的的数值标 记在二维坐标 的相应位置。 几种有代表性的白细胞“五分群”型分析仪: 几种有代表性的白细胞“五分群”型分析仪: (2)激光散射和细胞化学染色联合检测法: (Bayer公司ADVIA120)、(Abx公司Pentra120) 稀释液中加入髓过氧化物酶 (MPO)的底物,过氧化氢和 色原可使含MPO的细胞胞浆 染色。由于不同种类白细胞 含MPO不同,因此可以通过 染色的深浅加以区别。 加入特殊溶血剂使得除嗜碱 细胞以外的细胞全部裸核化。(2)激光散射和细胞化学染色联合检测法: (Bayer公司ADVIA120)、(Abx公司Pentra120) 用两个流式通道进行测定, 髓过氧化物酶通道(卤素灯 光源,测吸光度与散射光); 嗜碱性/核叶通道(激光光 源,测高角度散射光与低角 度散射光)。通道还同时进行 红细胞、血小板及网织红细 胞的测定。几种有代表性的白细胞“五分群”型分析仪: 几种有代表性的白细胞“五分群”型分析仪: (4)电阻抗和射频传导联合检测+特殊溶血剂法: (Sysmex公司NE-8000、SE-9000) 淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测通道(DC+RF) 嗜碱性细胞检测通道 (特殊溶血剂) 嗜酸性细胞检测通道 (特殊溶血剂) 幼稚细胞检测 通道(硫化氨基酸) 计数网织红细胞的方法: 在红细胞稀释液中加入可染RNA