医疗器械的无菌和初始污染菌检验ppt课件.ppt

医疗器械无菌检验标准医疗器械无菌试验检查要点指南（2010版）医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。还应该具有高度的责任心和严谨细致的工作作风。隔离系统无菌室在消毒处理完毕后，应检查空气中的菌落数。无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。

无菌性检查每批培养基随机不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长。灵敏度检查：
菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)［CMCC（B）26003］
铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)［CMCC（B）10104］
枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)［CMCC（B）63501］
生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)[CMCC(B)64941]
白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]
黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]菌液制备：
接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～35℃培养18小时～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，（23～28）℃培养（24～48）小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。菌液制备：接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，（23～28）℃培养（5～7）天，加入
（3～5）mL含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在
（2～8）℃可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在
（2～8）℃，在验证过的贮存期内使用。
平板划线法-斜线法：用接种环以无菌操作挑取菌悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线（3-4）条，再转动培养皿70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和第四次平行划线。
定期移植法:亦称传代培养保藏法，指将菌种接种于适宜的斜面培养基上，最适条件下培养，完成培养于(4～6)℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的一种短期菌种保藏方法。

操作步骤：
斜面制备接种培养保藏
接种培养基应符合无菌性检查及灵敏度检查的要求。检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。无菌检验有两种方法：直接接种法、薄膜过滤法
直接接种法:将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养。
薄膜过滤法:含抗菌、抑菌成分的供试品会抑制某些微生物的生长繁殖,所以用常规方法检查会出现假阴性的结果,但并不等于产品中没有微生物甚至是致病性微生物。所以采用薄膜过滤法来去除供试品中可溶的抑菌性成分,把细菌等微生物截留在滤膜上,然后再经过处理培养使所含微生物生长繁殖,从而使微生物检出。当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。
验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。菌种及菌液制备：除大肠埃希菌（Escherichiacoli）[CMCC(B)44102〕外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭