医疗器械无菌和初始污染菌检验ppt课件.ppt

医疗器械无菌和初始污染菌检验用于检查要求无菌的医疗器械是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌试验的目的：将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染。

医疗器械无菌检验标准医疗器械无菌试验检查要点指南（2010版）医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备医疗器械无菌检验所需设备无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。还应该具有高度的责任心和严谨细致的工作作风。隔离系统无菌室在消毒处理完毕后，应检查空气中的菌落数。无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查法试验前准备无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。

无菌性检查每批培养基随机不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长。灵敏度检查：
菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)［CMCC（B）26003］
铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)［CMCC（B）10104］
枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)［CMCC（B）63501］
生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)[CMCC(B)64941]
白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]
黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]培养基应符合无菌性检查及灵敏度检查的要求。检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。无菌检验有两种方法：直接接种法、薄膜过滤法
直接接种法:将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养。
薄膜过滤法:含抗菌、抑菌成分的供试品会抑制某些微生物的生长繁殖,所以用常规方法检查会出现假阴性的结果,但并不等于产品中没有微生物甚至是致病性微生物。所以采用薄膜过滤法来去除供试品中可溶的抑菌性成分,把细菌等微生物截留在滤膜上,然后再经过处理培养使所含微生物生长繁殖,从而使微生物检出。当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。
验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。菌种及菌液制备：除大肠埃希菌（Escherichiacoli）[CMCC(B)44102〕外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。
方法验证试验与灵敏度检验所有菌种区别：大肠埃希菌代替铜绿假单胞菌。取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。按规定温度培养3天~5天。各试验菌同法操作。与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查法和检查条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量，或增加培养基的用量，或使用中和剂或更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证。
方法验证试验也可与供试品的无菌检查同时进行。供试品包装须完好无损，尤其是只有一层包装的样品。进入无菌检验室的样品若有两层（或两层以上）包装的，需将外包装在传递窗（或缓冲间）拆除后，传入实验室。

操作人员准备：带口罩、帽子、穿专用无菌服、鞋进入无菌室。阴性对照（目的是验证试验是否存在污染）：供试品