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一种基于重组聚合酶扩增和纸基电化学发光的核酸检测方法 引言: 2020年全球疫情的爆发,让核酸检测成为了关键性的疾控手段。随着技术的不断提高和创新,核酸检测方法也在不断进步,从最初的PCR扩增方法到如今的新型检测方法,各种检测技术层出不穷。本文将重点介绍一种基于重组聚合酶扩增(RPA)和纸基电化学发光(PB-ECG)的核酸检测方法,该方法具有快速、准确、经济、可靠等优点,在疫情防控中有着广泛的应用前景。 一、RPA原理及技术优势 RPA是一种新兴的核酸扩增技术,它是利用一个叫做重组聚合酶的酶,引导核酸的扩增反应。相比传统的PCR技术,RPA具有很多的优势: 1.温和的反应条件-RPA能够在寻常室温下进行扩增,而不需要区分变性/退变性和扩展阶段的周期(反应周期几乎为零)。 2.操作简便-RPA的反应中只需加入核酸样品、RPA混合物和反应缓冲液即可,无需繁琐的前处理步骤。 3.特异性强-RPA反应使用特异性引物,可选择性地增加目标序列。 4.快速高效-RPA扩增速度快、效率高,时间从反应开始到结束仅需10-30分钟。 二、PB-ECG原理及技术优势 PB-ECG是一种新的电化学检测技术。在这种技术中,引物克隆在介电层厚的膜上,原位应用稀土染料(例如Ru(bpy)32+或Ru(phen)32+)荧光前体,荧光前体通过电氧化还原产生荧光信号,可实现传感器设计与膜制备,提高检测灵敏度。与传统的电化学检测方法相比,PB-ECG具有很多的优势: 1.检测灵敏度高-PB-ECG与着名的电化学检测技术相比,检测灵敏度更高(可达pM级别),可检测到非常低的目标物质。 2.检测速度快-PB-ECG与传统的电化学检测技术相比,检测速度更快,响应时间可达30毫秒级别。 3.可靠性高-PB-ECG具有极高的可靠性,其对其他干扰物质的响应很小,并且不受环境影响,比如温度、湿度等。 三、该方法的应用 该方法可以应用于多种核酸检测场景,如病毒、细菌、真菌、DNA甲基化等目标物的检测。在COVID-19的检测中,该方法已经得到了应用,并且获得了广泛的应用。本方法的操作简单、成本低廉、没有显式的依赖性,并且可以进行快速、大量的检测,大大提高了检测效率和准确性。在疫情防控期间,该方法可以在院内、社区、机场、车站和其他入境口岸等场所进行实时核酸检测,以确保有效的疫情防控。 结论: 总结来说,基于RPA和PB-ECG的核酸检测方法具有快速、准确、经济、可靠等优点,有着广阔的应用前景。该方法在COVID-19疫情中已经得到了实践,展现出非常显著的应用价值。我们相信,这种新型的核酸检测技术将成为以后疾控领域的重要工具,也将为人类健康事业做出积极贡献。