筛选营养缺陷型菌株的方法.pdf

筛选营养缺陷型菌株的方法--筛选营养缺陷型菌株的方法-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN筛选营养缺陷型菌株的方法--筛选营养缺陷型菌株的方法--工业微生物菌种的选育——营养缺陷型菌株的筛选来源：青岛海博关于菌株的几个概念：野生型菌株：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株其营养要求在表型上和野生型相同。?关于培养基：基本培养基（minimalmediumMM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基用[－]来表示。完全培养基（completemediumCM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。用[＋]来表示。补充培养基（supplementalmediumSM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组全培养基它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成。?（一）、营养缺陷型菌株的分离和筛选一般经诱变后再经中间培养、淘汰野生型、检出营养缺陷型、确定生长谱等。1、营养缺陷型的诱发???营养缺陷型的诱变方法和诱变因子与普通诱变育种基本相同。2、淘汰野生型???在诱变后的存活菌体中营养缺陷型菌株的数量很少一般仅占存活菌体的百分之几或千分之几而野生型细胞却大量存在因而要采取一些措施尽量淘汰野生型细胞使缺陷型菌株得以富集以利于检出。淘汰野生型菌株的方法有：抗生素法、菌丝过滤法、差别杀菌法和饥饿法等。（1）抗生素法：细菌用青霉素法：细菌细胞壁的主要成分为肽聚糖而青霉素能抑制细胞壁肽聚糖链之间的交链阻止合成完整的细胞壁。处在生长繁殖过程的细菌对青霉素十分敏感因而被抑制或杀死但不能抑制或杀死处休止状态的细菌。将诱变处理后的菌悬液分离加有抗生素的基本培养基上培养后野生型细胞由于正常生长繁殖而被杀死营养缺陷型细胞因不能生长而被保留下来达到富集目的。酵母菌用制霉素法：制霉素作用于真菌细胞膜上的甾醇引起细胞膜的损伤杀死生长繁殖过程的真菌起到富集营养缺陷型的作用。（2）菌丝过滤法???真菌和放线菌等丝状菌的野生型孢子在基本培养基中能萌发长成菌丝而营养缺陷型的孢子则不能萌发。把诱变处理后的孢子移入到基本培养液中振荡培养10h左右使野生型孢子萌发的菌丝刚刚肉眼可见用灭菌的脱脂棉、滤纸或玻璃漏斗除去菌丝。继续培养每隔3~4h过滤一次重复3~4次最大2筛选营养缺陷型菌株的方法--筛选营养缺陷型菌株的方法--限度地除去野生型细胞。然后稀释、涂皿分离。（3）高温杀菌法???利用芽孢杆菌类的芽孢和营养体对热敏感性的差异让诱变后的细菌形成芽孢然后把处在芽孢阶段的细菌移到基本培养液中振荡培养一定时间野生型芽孢萌发而营养缺陷型芽孢不能萌发。此时将培养物加热到80℃维持一定时间野生型细胞大部分被杀死缺陷型则得以保留起到了浓缩作用。3、营养缺陷型的检出??营养缺陷型菌株的检出方法有：点植对照法、夹层平板法、限量营养法和影印接种法等。（1）点植对照法诱变后的孢子或菌体经富集培