第四节营养缺陷型菌株的筛选.ppt

诱变育种第三节营养缺陷型菌株的筛选一、基本概念1、野生型菌株（wildtypestrain）
2、营养缺陷型（auxotroph）：
指通过诱变而产生的缺乏合成某些营养物质如氨基酸、维生素和碱基等的能力，必须在其基本培养基中加入相应的营养成分才能正常生长的变异株。
3、原养型（prototroph）：
营养缺陷型菌株经回复突变或重组变异后产生的菌株，其营养要求在表型上相同。
与之有关的培养基有三类
1、基本培养基(MM)：minimalmedium
能满足野生型菌株正常生长的培养基；[-]
2、完全培养基(CM)：completemedium
能满足各种营养缺陷型营养要求的天然或半合成培养基，如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基；[+]
3、补充培养基(SM)：supplementalmedium
在基本培养基中加入相应的营养成分；[A][B]
二、筛选营养缺陷型的步骤（一）诱变方法1、抗生素法：
原理：

一般细菌可以采用青霉素，酵母可采用制霉菌素。
2、菌丝过滤法：对于霉菌，因孢子生长后会长出菌丝体，就可用滤纸过滤法将菌丝滤去，而缺陷型孢子却因未发芽而不能滤过。
3、高温杀菌法：利用芽孢菌类的芽孢和营养体对热敏感性的差异。
（三）缺陷型的捡出（1）将一较平皿直径小1cm的金属圆筒蒙上一层灭菌的丝绒，用金属夹夹住，灭菌。
（2）完全培养基上长出的全部菌落在丝绒上轻轻一压，使之成为印模，标记方位。
（3）将基本培养基平皿和完全培养基平皿在标记的同一方位上先后轻轻一压，此菌印模即复印于上。（4）将CM和MM在恒温箱中培养。
（5）二平皿相同方位进行比较，即可发现在MM平皿上长出的菌落少于CM平板上的。MM上未长而相应于CM上长出的那几个菌落就可能是缺陷型。
此法要求平皿上菌落不能太多，菌落之间应有一定间隔。
２、点种法３、夹层法该法有两种情况：
（1）目的是捡出营养缺陷型
方法是将富集培养后的细胞接种到含有0.01%蛋白胨的MM上培养，野生型迅速长成大菌落，而生长缓慢的小菌落可能是营养缺陷型。
（2）目的是定向筛选某种特定的缺陷型
在基本培养基中加入某种单一的氨基酸、维生素或碱基等物质。