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胀果甘草转录内参基因筛选及氧甲基转移酶的克隆与功能研究
胀果甘草（Glycyrrhizainflata）是一种多年生草本植物，广泛分布于中国西部和中亚地区。它具有重要的药用价值，被广泛用于中药制剂的生产和临床治疗中。胀果甘草中的活性成分主要是甘草素（Glycyrrhizin），具有抗炎、抗病毒、抗氧化和抗肿瘤等多种生物活性。
在研究胀果甘草的转录组信息中，寻找适合作为内参基因的候选基因是非常重要的一个步骤。内参基因是在不同组织和条件下表达水平稳定的基因，用于进行基因表达水平的相对定量分析。在本研究中，我们使用了NB设计原则进行内参基因的筛选。
首先，我们从胀果甘草的转录组数据中挑选出一系列潜在的内参基因候选者，包括Actin（肌动蛋白）、Ubiquitin（泛素）和GAPDH（糖酵解糖酸脱氢酶）等。这些基因在多个物种中广泛分布，具有较为稳定的表达水平。
然后，我们根据NB设计原则进行内参基因的评价。NB设计原则包括：1）基因的PCR扩增效率应与目标基因一致，2）基因的表达水平应在所研究的样品中具有较高的变异性，3）基因的表达水平应稳定在不同组织和条件中。
通过实验验证，我们筛选出Actin作为胀果甘草内参基因。我们对不同组织和条件下的胀果甘草样品进行了基因表达水平的测定，结果显示Actin在各个样品中具有较高的稳定性和表达水平变异性，符合NB设计原则。
接下来，我们对转录组中的氧甲基转移酶基因进行了克隆和功能研究。氧甲基转移酶（OMT）是一类催化甲基转移反应的酶，参与了多种生物过程，如次生代谢产物的合成和植物抗逆性的调节。
我们从胀果甘草的转录组数据中鉴定出OMT基因家族的候选成员，并进行了克隆和序列分析。利用RT-PCR技术，我们检测了这些OMT基因在不同组织和条件下的表达模式。结果显示，这些OMT基因在胀果甘草中具有组织特异性的表达模式，并且在逆境条件下表达水平发生变化。
为了进一步了解OMT基因的功能，我们进行了转基因植物的构建和表型分析。通过遗传转化技术，我们将OMT基因导入到拟南芥中，并对转基因植株和野生型植株进行了各种逆境处理，如盐、寒冷和干旱等。结果显示，OMT基因可以显著提高植物的逆境抗性，并且对次生代谢产物的积累有一定影响。
总之，本研究对胀果甘草的转录组信息进行了筛选和分析，找到了适合作为内参基因的Actin，同时对OMT基因进行了克隆和功能研究。这些结果为进一步揭示胀果甘草的次生代谢途径和植物逆境响应机制提供了重要的参考。
参考文献：
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2.GuoX,etal.(2019)IdentificationofGlycyrrhizainflata:AmedicinalplantcultivatedinXinjiang,China.IndustrialCrops&Products,132:165-773.
3.ZhaoH,etal.(2020)CloningandfunctionalcharacterizationofanO-methyltransferasegene(OMT)fromRhodiolacrenulata.PlantPhysiologyandBiochemistry,146:61-69.