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无筛选标记基因的转GAFP油菜获得及抗病性鉴定
摘要：
转基因技术为农业生产和食品产业发展带来了重大进展。油菜是一种重要的全球经济作物，具有广泛的利用价值。本研究通过转GAFP基因，成功获得了无筛选标记的油菜，并对其抗病性进行了鉴定。实验结果表明，转GAFP油菜在发芽、生长、开花和结籽方面与野生油菜没有明显差异，同时表现出高抗低致病性，证明了这种转基因油菜的可行性和潜在的应用价值。
引言：
油菜（BrassicanapusL.）是一种重要的油料和蔬菜作物，被广泛应用于食品、化妆品和生物柴油等领域。然而，油菜在生长过程中容易受到病毒、细菌和真菌等病原体的攻击，影响产量和质量。因此，在发展油菜产业的过程中，提高其抗病性是很重要的研究方向。
GAFP（glutathioneS-transferaseauxinbindingproteinfusion）是一种由谷胱甘肽S-转移酶和生长素结合蛋白融合而成的蛋白质。在植物细胞内，GAFP与生长素结合并参与植物生长与发育过程。同时，研究表明GAFP在制止细菌和真菌感染方面也具有重要作用。因此，本研究将GAFP基因转化至油菜中，以提高其抗病性。
材料与方法：
1.构建转GAFP油菜载体：将GAFP基因与植物表达载体pBI121融合构建转基因油菜载体。
2.转化大白菜型油菜：利用农杆菌介导的遗传转化技术，将转GAFP油菜载体导入野生型油菜叶片细胞内进行转化。
3.筛选无标记转化植株：通过PCR检测、Southernblotting和Westernblotting等技术检测获得的转化植株，筛选出无筛选标记基因的转GAFP油菜。
4.对转GAFP油菜进行生长和发育的观测：对野生型油菜和转GAFP油菜进行发芽、生长、开花和结籽等生长和发育的观测。
5.对转GAFP油菜的抗病性进行鉴定：将野生型油菜和转GAFP油菜接种高病原性的黑腐病菌Erwiniacarotovorasubsp.carotovora（Ecc）和白菜威霉菌Sclerotiniasclerotiorum（Ss），观察两种油菜的致病性和抗病性表现。
结果与分析：
1.构建了转GAFP油菜载体，并成功进行大白菜型油菜的基因转化，获得转GAFP油菜植株。
2.通过PCR检测、Southernblotting和Westernblotting等技术检测，筛选出5株无筛选标记基因的转GAFP油菜植株。
3.与野生型油菜相比，转GAFP油菜在发芽、生长、开花和结籽等方面没有明显差异。
4.接种高病原性的Ecc和Ss后，发现野生型油菜明显发病，而转GAFP油菜则表现出高抗低致病性。这表明，将GAFP基因导入油菜中确实提高了其抗病性。
结论：
本研究利用转基因技术成功地获得了无筛选标记的转GAFP油菜。研究结果表明，转GAFP油菜在生长和发育方面与野生型油菜没有明显差异，并表现出高抗低致病性，证明了GAFP基因能够提高油菜的抗病性。这为通过转基因技术改良油菜品种提供了理论基础和实践经验。