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农杆菌介导转GAFP基因大豆的获得及抗病性的鉴定
农杆菌介导转GAFP基因大豆的获得及抗病性的鉴定
随着基因工程技术的不断发展和进步，利用农杆菌介导转基因技术对植物进行遗传改良已经成为一种非常常见的方法。其中，GAFP基因可使大豆具备抗病能力，因此其在大豆遗传改良中的应用具有重要的意义。
本文将介绍利用农杆菌介导转GAFP基因大豆的获得方法以及该大豆的抗病性鉴定结果。
一、农杆菌介导转GAFP基因大豆的获得
1.构建GAFP基因的表达载体
首先，需要构建包含GAFP基因的表达载体。本实验使用pCAMBIA1300作为GAFP基因的表达载体，在该载体中，GAFP基因与荧光素酶基因在T-DNA区被称为GFP/GUS基因。具体来说，GAFP基因在该表达载体中受到CaMV35S启动子和nopalin提升序列的调控。
2.通过农杆菌介导转基因技术将GAFP基因转移至大豆
农杆菌介导转基因技术是一种常用的转基因技术，其基本原理是利用农杆菌将外源基因转移到植物细胞中。具体操作如下：
（1）构建载体：将包含GAFP基因的表达载体转化至大肠杆菌。
（2）制备农杆菌：从转化后的大肠杆菌分离出含有相同载体的农杆菌。
（3）大豆再生：从大豆愈伤组织中分离出单个细胞，并再次培养以形成小型植物。
（4）转移：将制备好的农杆菌在植物中进行接种，接种后孵育一定的时间后再进行鉴定。
通过此方法，可以将GAFP基因成功转移到大豆中，获得转基因大豆。
二、对转GAFP基因大豆进行抗病性鉴定
“毒株”是一种影响大豆生产的病原体。本研究使用该“毒株”对转GAFP基因大豆和野生型大豆进行了病原性评估。
接种后，通过测量植株的高度和叶片数量等参数来确定转GAFP基因大豆与野生型大豆的生长情况。另外，对植物中毒的程度进行评估，发现转GAFP基因大豆的毒株感受能力比野生型大豆要低。
通过以上方法，成功获得了GAFP基因转移至大豆中的转基因大豆，并对其进行了抗病性鉴定。这使得大豆在遭受病害时能够具有更好的生长状态和生存机会，从而为大豆的栽培和生产提供了更加历史化的手段。