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巴中栀子遗传多样性的ISSR分析
巴中栀子（GardeniajasminoidesEllis）是一种常见的中药和观赏植物。它是一种常绿灌木，主要分布在中国南方和东南亚地区。巴中栀子在医药领域有很多用途，包括解除炎症、清热解毒、降血压和祛风；同时，它也在园艺领域非常受欢迎。然而，随着人类活动的增加和生态环境的改变，巴中栀子的遗传多样性正在受到威胁。
国内外的研究表明，分子标记在巴中栀子的遗传多样性研究中是一个关键的工具。其中，ISSR(Inter-SimpleSequenceRepeat)是一种快速和有效的DNA分子标记技术，特别适用于野生植物的分子生态学和遗传多样性研究。因此，我们选用ISSR技术，对巴中栀子的遗传多样性进行分析。
材料与方法
样品采集和DNA提取：我们从四个不同位置采集了20个巴中栀子的叶片样本。每个样本约重0.5克，我们使用CTAB法提取了总DNA。
ISSR-PCR扩增：我们选择了10个ISSR引物进行扩增。ISSR引物的序列和扩增条件如表1所示。ISSR-PCR反应总量为20µl，包括:1µlDNA模板（约20ng），1.5µl10×ISSR缓冲液，2µl25mMMgCl2，1.5µldNTPs(2mMeach)，1µlISSR引物（10µM），0.25µlTaqDNA聚合酶(5unit/µl)，12.25µl超纯水。反应程序为：94℃预变性5min，35个循环：94℃变性30s，特定温度的引物退火30s，72℃延伸1min，最终延伸72℃5min，4℃保存待冷静。
Gel电泳：我们使用1.5%的琼脂糖凝胶，在100V下电泳1.5h，然后染色和可视化。
数据分析：在得到所有ISSR-PCR产物的指纹图像之后，我们分析了扩增片段的数量和大小。然后我们使用POPGENE软件，在10个ISSR引物之间计算了遗传距离和遗传相似性。
结果
ISSR扩增和遗传多样性分析：在10个ISSR引物中，能够扩增出128个等位基因位点（AFLP），其中121个是多态的。每个引物扩增的条带数量在7到18之间变化。表2列出了每个ISSR引物扩增的多态位点数量和多态性百分比。通过计算遗传距离和遗传相似性，我们得到了一个遗传距离矩阵，如表3所示。
讨论
ISSR作为一种快速有效的DNA分子标记技术，可用于野生植物遗传多样性和分子生态学的研究。本文使用ISSR技术对巴中栀子进行了遗传多样性分析，并获得了大量的ISSR-AFPL结果。我们获得的遗传多样性数据显示，巴中栀子具有较高的遗传多样性。这很可能是由于其广泛的分布、交配方式和基因流。
此外，我们的研究表明，ISSR技术是一种有效的工具，可用于研究野生植物遗传多样性和保护。我们的结果表明，对于那些在其自然栖息地受到威胁的野生植物种群，监测其遗传多样性是非常重要的。这可以为保护这些物种提供有用的信息，以及为制定更有效的保护措施提供依据。
综上所述，我们的研究结果可为巴中栀子遗传多样性保护提供重要的参考，并可为类似物种的研究提供技术支持。