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副猪嗜血杆菌毒力菌株与非毒力菌株差异蛋白的筛选及鉴定
副猪嗜血杆菌（Actinobacilluspleuropneumoniae）是一种主要引起猪呼吸道疾病的病原菌。在该细菌中，存在着具有不同毒力的细菌株，如何准确鉴定这些毒力差异的菌株是开展病原学研究的基础。
近年来，随着生物技术的发展，基于蛋白质组学的方法逐渐成为了识别不同菌株之间的蛋白质差异的重要手段。本文选用与副猪嗜血杆菌毒力显著相关的APXⅣ基因编码的蛋白为靶标，通过蛋白质组学的方法筛选并鉴定了副猪嗜血杆菌毒力菌株与非毒力菌株之间不同表达的蛋白质，进一步探讨了这些蛋白对副猪嗜血杆菌毒力的影响。
首先，通过PCR方法，扩增出APXⅣ基因并进行测序确认，获得APXⅣ基因序列，进一步利用基因工程技术表达APXⅣ蛋白和纯化该蛋白，为后续的蛋白质组学实验提供了可靠的蛋白。
其次，采用二维凝胶电泳和MALDI-TOF/TOF质谱技术，对副猪嗜血杆菌毒力菌株和非毒力菌株中APXⅣ基因编码的蛋白质进行比较分析。结果发现，在毒力菌株中，与非毒力菌株相比有9种差异蛋白质显著表达，其中有5种蛋白和细胞壁结构相关，2种蛋白和细胞分裂和生长相关，1种蛋白与代谢相关，1种蛋白与氧化应激反应相关。通过KEGG通路分析，这些蛋白的作用可能与副猪嗜血杆菌毒素的合成、细胞壁合成和修复、氧化应激等过程有关。
最后，将这些蛋白进行功能分类和聚类分析，得到了这些蛋白与副猪嗜血杆菌毒力的关系。研究发现，细胞壁结构相关的蛋白在毒力菌株中表达增加，提示细胞壁的组成和结构与副猪嗜血杆菌的毒力有关；代谢相关的单核苷酸莱维霉素在非毒力菌株中表达量显著高于毒力菌株，可能与细胞内能量代谢的差异有关；氧化应激反应相关的蛋白在毒力菌株中表达增加也说明对氧化应激的适应能力可能与副猪嗜血杆菌的毒力有关。
综上所述，本文通过蛋白质组学的方法筛选和鉴定出副猪嗜血杆菌毒力菌株与非毒力菌株差异的蛋白质，为深入研究副猪嗜血杆菌的致病机理提供了有力的支持。