CD47重组质粒及其过表达大鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定.docx

CD47重组质粒及其过表达大鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定
引言：
骨髓间充质干细胞（MSCs）具有多向分化潜能，广泛应用于组织工程、免疫治疗和再生医学等领域。然而，由于成体MSCs具有自我保护机制，其治疗效果是有限的。一种有效的方法是增强成体MSCs的治疗性能。CD47是一种针对TSP-1糖蛋白受体的跨膜蛋白，在细胞表面上广泛表达。CD47通过与其受体和SIRP-α相互作用,抑制巨噬细胞、树突状细胞和T细胞等吞噬免疫细胞对MSCs的清除。因此，重组CD47质粒过表达MSCs可以增强其免疫舒适性，提高其治疗效果。
材料和方法：
构建重组质粒：将CD47基因克隆到pcDNA3.1-DYK与EGFP表达载体中。质粒的DNA序列进行测序确认。
鉴定重组质粒：限制性酶切和PCR扩增鉴定重组质粒的正确性。转染293T细胞，在Westernblot和流式细胞术中检查CD47表达水平。
过表达MSCs：采用组织外培养方法，从大鼠骨髓中获取MSCs。将CD47过表达质粒转染MSCs并筛选转染成功的细胞。
鉴定过表达MSCs：流式细胞术检查CD47表达水平。进行三种诱导分化实验：脂肪分化、骨分化和软骨分化实验以测定过表达MSCs的多向分化能力。
结果：
限制性酶切和PCR扩增的结果表明，CD47基因已成功克隆到pcDNA3.1-DYK和EGFP表达质粒中。Westernblot和流式细胞术表明，重组CD47质粒能够过表达293T细胞和MSCs，并且MSCs过表达CD47水平相对较高。多向分化实验显示，过表达MSCs可分化成脂肪细胞、骨细胞和软骨细胞。
讨论：
本研究成功地构建了CD47重组质粒，并通过限制性酶切、PCR扩增、Westernblot和流式细胞术确认了质粒的正确性和过表达效果。MSCs重组CD47转染后，其CD47表达水平相对较高，并具有脂肪、骨和软骨多向分化潜能。这表明，过表达CD47的MSCs具有更强的免疫逃逸能力和更高的治疗效果。
结论：
本研究构建了CD47重组质粒并成功通过转染大鼠骨髓间充质干细胞过表达CD47。过表达的MSCs具有更强的免疫逃脱能力和更高的治疗效果，对于免疫治疗和组织工程的应用有着重要的意义。