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胀果甘草酸性多糖的分离纯化、结构分析及免疫活性测定
摘要
胀果甘草是一种重要的中药材，其中富含多种生物活性成分。本研究以胀果甘草中的酸性多糖为研究对象，运用离心技术、凝胶层析、纤维素色谱和HPLC等多种手段进行分离纯化，并对其进行结构分析和免疫活性测定。结果表明，所得到的酸性多糖为二糖基丙酸型半乳糖醛酸酸多糖，具有较好的免疫增强活性，对机体免疫系统有显著的调节作用。
关键词：胀果甘草；酸性多糖；分离纯化；结构分析；免疫活性
Abstract
Glycyrrhizainflateisanimportantmedicinalplantthatcontainsavarietyofbioactivecomponents.Inthisstudy,theacidicpolysaccharidesinGlycyrrhizainflatewereselectedastheresearchobject.Centrifugation,gelchromatography,cellulosechromatography,andHPLCwereusedtoseparateandpurifytheacidicpolysaccharides,andtheirstructuresandimmuneactivitiesweredetermined.Theresultsshowedthattheacidicpolysaccharideswereadisaccharide-based2-O-β-D-galactosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyluronicacidpolysaccharide,whichhadgoodimmune-enhancingactivityandsignificantlyregulatedtheimmunesystem.
Keywords:Glycyrrhizainflate;acidicpolysaccharides;separationandpurification;structuralanalysis;immuneactivity
一、引言
胀果甘草，即黄芪，是中国传统药材之一。在中医学中，胀果甘草被广泛地用于免疫调节、肝肾保护、神经保护、心脏保护等方面。从胀果甘草中分离出的生物活性成分也更为多样，其中，酸性多糖具有免疫活性、抗氧化活性、抗肿瘤活性等多种生物学活性。因此，本研究的目的是从胀果甘草中分离纯化一种具有免疫调节活性的酸性多糖，并对其结构进行分析，为进一步研究胀果甘草的药理作用提供理论依据。
二、实验材料与方法
2.1实验材料
胀果甘草干燥根，阳离子单交换树脂（D001），纤维素色谱柱（DEAE-52），高效液相色谱仪（HPLC），Murinemacrophagecellline（RAW264.7），脾细胞，文氏试剂，EDTA，DMSO，MTT，RPMI1640等。
2.2实验方法
（1）酸性多糖的提取：取10g胀果甘草根，粉碎后加入200ml蒸馏水，加热水浴回流2h，离心取上清。将上清加入阳离子单交换树脂，搅拌2h，离心收集树脂，用0.1mol/LNaCl洗脱胶体。
（2）凝胶层析：将洗脱胶体经凝胶层析纯化，洗脱后得到含有酸性多糖的组分。
（3）纤维素色谱：将组分经纤维素色谱柱进行分离纯化。
（4）HPLC：对所得样品进行HPLC分析，以检测纯化效果和样品纯度。
（5）免疫活性测定：以RAW264.7细胞和脾细胞为模型，检测所得多糖对细胞的免疫活性。
三、实验结果与分析
3.1酸性多糖提取与凝胶层析
经过阳离子单交换树脂吸附，用0.1mol/LNaCl洗脱后，所得胶体经过凝胶层析，检测到了一些新的组分，其中含有的酸性多糖亦得到了纯化（见图1和表1）。
图1酸性多糖的纯化图
表1酸性多糖纯化后的检测结果
粉末样品胁迫样品
色素暗淡案色润滑
强烈咸味明亮无焦糊味
3.2纤维素色谱分离
经过凝胶层析纯化后，仍有多种多糖混杂，为进一步分离所得的酸性多糖，本研究采用了纤维素色谱柱。经过纤维素色谱柱的分离，所得的酸性多糖能够显著提高细胞的增殖率，表明其具有明显的免疫活性。
3.3酸性多糖的结构分析
将所得的酸性多糖进行了分析，分析结果表明，该酸性多糖为二糖基丙酸型半乳糖醛酸酸多糖，其结构如图2所示。
图2酸性多糖结构示意图
三、结论
通过本研究，我们成功地从胀果甘草中分离纯化了一种酸性多糖，并对其进行了结构分析和免疫活性测定。所得的酸性多糖为二糖基丙酸型半乳糖醛酸酸多糖，具有较好的免疫调节作用，可以对机体免疫系统产生显著的调节作用。这为进一步研究胀果甘草的药理作用提供了理论依据。