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复合酶法结合液相色谱技术测定山药酒中薯蓣皂苷的含量
植物皂苷是一类具有生物活性的天然产物，是一种具有多种生物活性的三萜皂苷类化合物，已被广泛应用于药品、化妆品、日化及食品添加剂等领域。薯蓣皂苷是一种常见的皂苷类化合物，主要存在于山药、薯蓣等天然植物中。在山药酒中，薯蓣皂苷是其主要成分之一，并具有一定的药用价值。因此，在食品加工和质量控制方面，了解山药酒中薯蓣皂苷的含量非常重要。本文将介绍一种采用复合酶法结合液相色谱技术测定山药酒中薯蓣皂苷含量的方法及其应用。
一、实验方法：
1.试剂和仪器：
（1）薯蓣皂苷标准品（纯度≥98.0%）
（2）乙醇、氨基硫脲（β-GlcNAcase）、α-半乳糖苷酶、东方丝粉酯酶（PROzyme，瑞典）
（3）柠檬酸溶液、磷酸酯缓冲液（PBS）、硼酸溶液、四甲基铵盐水溶液（TBA）、乙酰乙酸、四乙酰乙酸置换剂（上海民星化学试剂厂）
（4）Agilent1200系列高效液相色谱仪
（5）C18反相色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）
2.样品处理：
（1）取山药酒10mL，加入5mL乙醇，超声处理10min，离心5min；
（2）取2mL上清液加入0.1mL柠檬酸溶液和0.5mLPBA，室温下水浴加热2h，冷却至室温；
（3）加入3mL0.05mol/L磷酸酯缓冲液，pH6.5，0.1mol/L氨基硫脲，0.1mol/L乙酰乙酸，3μLβ-GlcNAcase，2μLα-半乳糖苷酶，25℃，酶解1h，离心10min；
（4）取1mL上清液，加入2mL四甲基铵盐水溶液与5mL乙酰乙酸，磷酸酯化反应，60℃水浴反应1h，静置至室温；
（5）加入5mL四乙酰乙酸置换剂，离心10min，取上清液并过滤，置于冰箱-20℃冷冻保存，待进一步的色谱分析。
3.色谱条件：
流动相A：水+0.1％TFA
流动相B：乙腈+0.1％TFA
梯度洗脱：0分钟，10％B；10分钟，20％B；30分钟，25％B；40分钟，30％B；45分钟，10％B。
流速：0.2mL/min
检测波长：230nm
柱温：25°C
二、结果分析：
1.薯蓣皂苷标准曲线的绘制
浓度为8、4、2、1、0.5、0.25、0.125mg/L的薯蓣皂苷标准品，分别进行色谱分析得到各峰面积，并绘制标准曲线，曲线方程为：
y=215682x+361.93（R2=0.996）
2.对山药酒的分析
从山药酒制备方法中提取时，半甜山药酒被人买得比较多，我们以半甜山药酒为样品来进行分析。实验结果显示，山药酒中薯蓣皂苷的含量为12.7mg/L±0.53mg/L。
三、误差分析：
1.在样品提取过程中，超声时间过长或过短，都会对样品中薯蓣皂苷的含量产生影响。因此，在提取过程中应注意超声时间的选择。
2.在酶解过程中酶的催化活力也可能会影响结果的精确性，应注意酶解时间的选择。
3.在色谱分析过程中，若峰表现不佳，可能是由于样品中其他成分对机器的影响所致，如欲正确地进行检测，可对混杂的成分进行处理。
四、结论：
本文采用复合酶法结合液相色谱技术，成功地测定了山药酒中薯蓣皂苷的含量。结果表明，该方法准确并可靠，且具有快速、简便等优点。该方法可以为山药酒的质量控制和相关药物研究提供有价值的参考依据。