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基于反转录-环介导等温扩增技术检测金黄色葡萄球菌
摘要：
金黄色葡萄球菌是一种广泛分布于自然界和医院环境中的细菌。它是机会性病原菌，在临床中常引起感染性疾病，且越来越多地表现出对多种抗生素的耐药性。因此，检测金黄色葡萄球菌变得非常重要。本文基于反转录-环介导等温扩增技术，设计了一种高效、灵敏、特异性强的检测金黄色葡萄球菌的方法。该方法利用了反转录-环介导反应的机制，结合参考基因及金黄色葡萄球菌特异性DNA序列，成功识别金黄色葡萄球菌DNA，并能够对样品中的细菌进行测量。该方法经过实验证明，可以在1×105-1×107cfu/mL范围内检测金黄色葡萄球菌。
Abstract:
Staphylococcusaureus,abacteriumwidelyfoundinnatureandhospitalenvironment,isanopportunisticpathogenthatoftencausesinfectiousdiseasesinclinicalpracticeandincreasinglyexhibitsresistancetomultipleantibiotics.Therefore,itisveryimportanttodetectStaphylococcusaureus.Basedonthereversetranscription-loop-mediatedisothermalamplification(RT-LAMP)technology,wedesignedanefficient,sensitive,andspecificmethodfordetectingStaphylococcusaureus.ThemethodutilizesthemechanismoftheRT-LAMPreaction,combinedwithreferencegenesandStaphylococcusaureus-specificDNAsequences,tosuccessfullyidentifyStaphylococcusaureusDNAandmeasurethebacteriainsamples.OurresultsdemonstratethatthemethodcandetectStaphylococcusaureusinarangeof1×105-1×107cfu/mL.
Introduction:
金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，广泛分布于医院环境和自然界中。它是机会性病原菌，在临床上常引起多种感染疾病，例如皮肤感染、呼吸道感染和食品中毒等。其中，耐药性的金黄色葡萄球菌常成为难治性感染的主要病因，对患者健康和医疗系统的安全造成威胁。因此，准确、快速地检测金黄色葡萄球菌变得尤为重要。
传统的检测金黄色葡萄球菌的方法大多需要进行样品的培养和鉴定，这些方法需要较长的等待时间和较为复杂的实验操作。因此，需要使用更为高效、敏感、准确的检测金黄色葡萄球菌的新方法。
本文基于反转录-环介导等温扩增技术，设计了一种简单、高效、特异性强的检测金黄色葡萄球菌方法。我们利用该技术的机制和金黄色葡萄球菌特异性DNA序列，实现了样品中金黄色葡萄球菌的快速检测。
MaterialsandMethods:
材料和试剂：
为实现反转录-环介导等温扩增技术检测金黄色葡萄球菌，我们需要使用以下试剂和材料：
-RT-LAMP反应试剂盒包括BstDNApolymerase、反转录酶、MgSO4、dNTPs、酶混合染料等；
-具有金黄色葡萄球菌特异性序列的引物；
-参考基因用于判断反转录-环介导等温扩增反应的启动和终止。
实验步骤：
本研究采用反转录-环介导等温扩增技术检测金黄色葡萄球菌的DNA，具体实验步骤如下：
1.样品制备
我们采用革兰氏染色的方法将金黄色葡萄球菌样品经过检测并鉴定。然后将金黄色葡萄球菌菌株培养在含有3%的NaCl、0.1%的肉汤、0.5%酵母提取物、0.1%葡萄糖的LB培养基中，静置在37℃孵育器中，直到菌落生长到适合的浓度（OD600为0.5）。
2.DNA提取
生长曲线上的菌落收集，并用无菌的PBS洗涤。细胞沉淀经过诱导裂解，将RNA和DNA提取到载体上，通过其储存。
3.引物设计
本试验中，我们根据GenBank数据库中的金黄色葡萄球菌16SrRNA基因序列，设计了一对具有特异性的引物，以检测金黄色葡萄球菌中的16SrRNA特异性序列。引物的设计包括2个内部引物（FIP、BIP）和2个外部引物（F3、B3）。
4.RT-LAMP反应
在RT-LAMP反应前，我们首先对金黄色葡萄球菌DNA进行反转录，然后将反转录产物与环式引物、双链DNA结构参考基因混合，放入环式反应管中，并在等温条件下进行扩增反应。
5.电泳检测
根据RT-L