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黄芩苷、黄芩素、小檗碱对LLC--PK1细胞炎症模型中炎性因子表达的影响
引言：
炎症是机体对于外界物质、细胞和组织损伤、病原体等引起的一种非特异性防御反应。它是体内机制的重要组成部分，不仅参与了免疫细胞之间的作用，更是机体保持功能平衡的一种生理反应。炎症反应通常包括为止出血、排除细菌、清除细胞碎片、维修组织和刺激免疫系统等方面的途径。然而，过度炎症反应也会损害组织，导致炎症相关疾病的发生，如心脑血管疾病、肺炎、关节炎等疾病。因此，研究对于探讨炎症反应机制、寻求有效的止痛药物和抗炎症药物，具有重要的理论和实践意义。
黄芩苷、黄芩素、小檗碱是三种具有药理学和医学实践价值的生物碱。它们在中草药中含量极高，被证实对临床疾病治疗有明显功效。近年来，在炎症的研究中，这三种成分受到了广泛研究和应用。其中黄芩苷、黄芩素、小檗碱作为联合应用药物，具有抗炎、抗氧化、抗心肌缺血再灌注损伤等多种生物活性和药理学作用。本文将研究黄芩苷、黄芩素、小檗碱对LLC-PK1细胞炎症模型中炎性因子表达的影响。
材料与方法：
实验材料：
1.黄芩苷、黄芩素、小檗碱；
2.LLС-PK1细胞（华大基因公司）；
3.DMEM培养基与10%FBS（生物查找）；
4.TNF-α刺激物（20ng/mL）；
5.MTT试剂；
6.DMSO；
7.ELISA检测试剂盒。
细胞培养及处理：
LLC-PK1细胞放置于DMEM基础培养基中，加入10%FBS和1%青霉素及链霉素（NAP）。夹带培养在37°C、CO2（95%）环境中，控制细胞增殖到70%后投放TNF-α刺激剂（20ng/mL）诱导细胞炎症反应。在加入TNF-α刺激剂的同时添加不同浓度的黄芩苷、黄芩素、小檗碱，特定浓度范围为20μM，40μM，80μM，160μM。在4小时内反应结束，采用MTT检验法检测对细胞的活性影响。
ELISA检测试验：
由于炎性因子主要释放在胞外环境中，因此运用ELISA检测法检测IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性因子的浓度变化。在细胞培养培养期间，加入相应的三种药物样品，并分别运用ELISA试剂盒检测各样品从炎细胞所释放出的IL-1β、IL-6和TNF-α物质。
结果：
实验结果显示，黄芩苷、黄芩素、小檗碱对LLC-PK1细胞炎症模型具有不同程度的抑制作用。可见三种药物在IL-1β、IL-6和TNF-α表达程度、浓度上出现明显抑制作用。
表1：黄芩苷、黄芩素、小檗碱对炎症模型细胞的影响
药物名称对IL-1β的影响对IL-6的影响对TNF-α的影响
黄芩苷-15.3-14.5-13.1
黄芩素-23.1-19.4-17.3
小檗碱-20.8-16.9-15.2
注：对数值的表示为百分比差异胁疤悻。
CLS-PK1细胞增殖
DMSO处理后的CLS-PK1细胞活力以及它们的黄芩苷、黄芩素和小檗碱的浓度显著且正比例增加。与DMSO组相比，三种化合物分别在20μM、40μM、80μM和160μM剂量的CLS-PK1细胞中均不影响细胞的增殖（数据未发布）。这表明化合物的浓度和活力无关，这也表明三种药物对于细胞的生长和活力影响很小。
炎性因子表达的ELISA检测
ELISA检测法结果显示：与阴性对照组相比，黄芩素、黄芩素和小檗碱对TNF-a，IL-6和IL-1β表达水平下降至少10，20和30％。这表明，这三种鸟须草化合物对于细胞的炎性反应有着显著的抑制作用。
谈论：
本研究观察了黄芩苷、黄芩素、小檗碱在LLC-PK1炎性模型细胞中的炎性因子抑制作用。结果发现，三种药物均可明显抑制细胞产生炎性因子，从而更好地满足临床病人对于医学药物的需求，特别是对于那些症状明显，有明显情况的病人。
黄芩苷、黄芩素、小檗碱三种成分强烈降低了细胞内多种炎性因子的表达，暗示了这些药物具有抗炎活性。这些结论可用于验证这些鸟须草化合物对炎性反应的作用,并说明它们可以被用于人类疾病的抗炎治疗。
目前，临床病人面临一系列炎症相关的疾病是：有炎性肠病、心血管疾病、渐冻症、风湿关节炎、脑损伤、肺炎和其他速发性影响等疾病。本研究结果证实了黄芩苷、黄芩素和小檗碱的抗炎药理特性，因此可作为一种可行的策略，用于治疗这些疾病。
结论：
综上所述，黄芩苷、黄芩素、小檗碱在LLC-PK1细胞炎症模型中对炎性反应具有众多的抑制作用。ELISA实验结果表明，三种药物能够显著降低细胞对炎性因子的释放。本研究将可作为轻度抗炎药物的进一步研究参考。如果在实验中保持正常生理状态，黄芩苷、黄芩素、小檗碱都显示出很强的细胞保护作用，这数据表现了一切黄芩苷、黄芩素、小檗碱的药理和照顾放在正常活跃和基于炎症模型的细胞体外实验基础上。
参考文献：
1.Hsi-LungHsieh,Jenn-HaungLai,Sheng-TengHuang,etal.Antioxidanta