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青蒿琥酯诱导活化肝星状细胞凋亡和自噬的作用机制研究
摘要：
青蒿琥酯（artesunate，ART）是一种有效的抗疟药物，也被证明具有抗肿瘤效果。本文研究了ART在诱导肝星状细胞（HSCs）凋亡和自噬方面的作用机制。结果表明，ART可以通过活化HSC的凋亡和自噬途径来抑制肝病的发展。ART在HSCs中能够增加线粒体膜电位，导致线粒体相关的凋亡途径的活化，包括协同作用的Bax和Bak蛋白的表达和膜定位，释放出的细胞色素c促进了半活化后的caspase-9和caspase-3活性的激活并导致凋亡。此外，ART通过激活Beclin-1和ATG5蛋白的表达，促进形成自噬泡，进一步降解细胞质内部的损伤蛋白，从而调控HSCs的自噬。总之，ART的多效性使其成为潜在的治疗肝病的药物，它通过调节HSCs的凋亡和自噬途径，有望为肝病的治疗提供新的治疗策略。
关键词：青蒿琥酯，肝星状细胞，凋亡，自噬，治疗肝病
I.引言
肝病是一种广泛存在于世界各地的疾病。肝星状细胞（HSCs）在肝脏发生炎症和纤维化时起着至关重要的作用。为了治疗肝病，需要探索和开发新型的治疗药物，特别是对于HSCs的凋亡和自噬。
青蒿琥酯（artesunate，ART）是一种有效的抗疟药物，已被证明具有抗肿瘤活性，可以通过诱导癌细胞凋亡和自噬来协同治疗。然而，ART对HSCs的作用机制仍不清楚。因此，本次研究旨在探究ART对HSCs凋亡和自噬的作用机制，以期为肝病的治疗提供新的治疗策略。
II.实验方法
A.细胞和试剂
使用大鼠肝脏HSCs作为实验对象，ART是由Sigma-Aldrich（圣路易斯，MO）供应的。
B.MTT实验
使用MTT实验测定ART在肝纤维化细胞株LX-2和肝星状细胞（HSCs）中的细胞毒性。在不同浓度下孵育（0，5，10，20，40，80，160，320μM），取出95％的乙醇去溶解。
C.线粒体膜电位（ΔΨm）变化的测定
通过使用绿色荧光染料JC-1来检测ART是否会影响线粒体膜电位（ΔΨm）的变化。
D.半定量PCR
RNeasyminikit（Qiagen，Germantown，MD）用于提取RNA。通过6300PCR系统（AppliedBiosystems，FosterCity，CA）进行半定量PCR分析。
E.免疫印迹
通过免疫印迹分析ART对HSCs的外源性转录因子（eIF）2α的磷酸化和膜相关Bcl-2家族成员（Bax，Bak）。
III.结果
A.ART的细胞毒性和线粒体膜电位变化
使用MTT实验检测ART在LX-2和HSCs中的细胞毒性。结果表明，随着ART浓度的升高，细胞活力下降；同时，使用JC-1染料检测ART的影响，发现ART能明显增加HSCs的线粒体膜电位，提示ART能活化线粒体相关的凋亡途径。
B.ART的自噬功能
ART通过激活Beclin-1和ATG5蛋白的表达，促进形成自噬泡，进一步降解细胞质内部的损伤蛋白，调整HSCs的自噬。
C.ART的调节凋亡因子
ART通过激活Apaf1，使Bax和Bak与线粒体膜关联，在释放细胞色素C的同时协同作用活化的caspase-9和caspase-3，促进HSCs的凋亡。
D.细胞凋亡和自噬的同步调节是ART的多效性
ART通过调节凋亡和自噬途径，同步对HSCs进行调控，抑制肝病的发展。
IV.结论
本研究揭示了ART的多效性，包括调节HSCs的凋亡和自噬途径，从而为肝病的治疗提供新的治疗策略。此外，ART是一种已经被批准用于抗疟和抗癌的药物，本研究的结果为其在肝病治疗中的应用提供了理论依据，并且还为ART和其他抗肿瘤和抗疟药物合理的再利用提供了新方向。