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p53在青蒿琥酯诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡及抑制其增殖中的作用
摘要
青蒿琥酯是一种天然化合物，具有广泛的抗肿瘤活性。本研究旨在探讨青蒿琥酯是否能够诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡及抑制其增殖，并探讨这一过程中p53的作用机制。结果表明，青蒿琥酯可以有效地诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡，并抑制其增殖。此外，p53是青蒿琥酯诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡的重要媒介。因此，青蒿琥酯可能成为治疗肝癌的重要药物之一。
Introduction
肝癌是世界各地广泛分布的一种恶性肿瘤，属于高度恶性肿瘤。青蒿琥酯是一种从青蒿植物中提取的天然物质，具有广泛的抗肿瘤活性，被广泛地应用于肿瘤治疗。
肝星状细胞是肝脏中重要的修复细胞，具有维持肝脏健康平衡的作用。在肝癌中，星状细胞受到活化，表现出增殖和分泌的异常。因此，针对肝星状细胞的治疗成为了肝癌治疗的一个新方法。
p53是细胞中一个重要的肿瘤抑制基因，在细胞衰老和细胞凋亡中发挥重要的作用。有证据表明，p53在肝癌中的失活往往会导致肝癌的快速发展。因此，p53也成为了肝癌治疗的一个重要目标。
本研究旨在探讨青蒿琥酯是否能够诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡及抑制其增殖，并探讨这一过程中p53的作用机制。
MaterialsandMethods
1.细胞培养
大鼠肝细胞株（LX-2）在DMEM培养基中培养，添加10%FBS和1%青霉素/链霉素。细胞在37℃下以5%CO2保护性培养。细胞在平皿中生长到80%后进行分离。培养得到原代肝星状细胞后，进行下一步实验。
2.青蒿琥酯的制备
本研究使用乙酸乙酯进行提取。首先将青蒿粉末加入乙醚中，连续摇动30min，过滤。过滤液加入乙酸乙酯中，摇动30min，过滤。重复上述过程，将过滤液收集起来，使用旋转蒸发仪进行浓缩。得到青蒿琥酯，进行下一步实验。
3.细胞药物处理
大鼠原代肝星状细胞在12孔板中生长至60%。加入青蒿琥酯50μM，静置48h。测定各种生物活性指标，包括细胞增殖和凋亡率。
4.序列分析
使用PCR扩增方法从大鼠肝细胞株中获得p53蛋白，构建重组质粒，将其转入大鼠原代肝星状细胞中。转染12h后进行下一步实验。
Results
1.青蒿琥酯诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡
本实验中使用青蒿琥酯处理大鼠原代肝星状细胞，测定细胞的凋亡率。结果表明，青蒿琥酯可以明显地诱导大鼠原代肝星状细胞的凋亡（图1）。此结果提示，青蒿琥酯可能能够作为肝癌治疗的一个药物使用。
图1：青蒿琥酯诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡
2.青蒿琥酯抑制大鼠原代肝星状细胞的增殖
本实验中使用青蒿琥酯处理大鼠原代肝星状细胞，测定细胞的增殖率。结果表明，青蒿琥酯可以明显地抑制大鼠原代肝星状细胞的增殖（图2）。此结果提示，青蒿琥酯可能能够作为肝癌治疗的一个药物使用。
图2：青蒿琥酯抑制大鼠原代肝星状细胞的增殖
3.p53参与青蒿琥酯诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡的过程
使用PCR方式从大鼠肝细胞株中获得p53蛋白，构建重组质粒，将其转入大鼠原代肝星状细胞中，测定细胞的凋亡率。结果表明，大鼠原代肝星状细胞中p53表达明显增加（图3），并能有效地增加细胞凋亡率（图4），提示p53在青蒿琥酯诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡的过程中发挥了重要的作用。
图3：p53参与青蒿琥酯诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡
图4：p53增加细胞凋亡率
Discussion
本研究表明，青蒿琥酯可以有效地诱导大鼠原代肝星状细胞凋亡，并抑制其增殖。此外，p53也参与了这一过程中。这一结果提示，青蒿琥酯可能成为治疗肝癌的重要药物之一。而p53的作用，则为肝癌治疗提供了新的思路。
在今后的研究中，我们可以进一步探讨青蒿琥酯在肝癌中的治疗作用，针对p53的治疗也可以进一步探究。这一研究为青蒿琥酯的开发提供了新的思路，并为肝癌治疗提供了新的致力点。