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锰诱导体外鸡脾淋巴细胞HSPsmRNA表达的影响
摘要：
本文旨在探究锰对诱导体外鸡脾淋巴细胞HSPsmRNA表达的影响。研究结果表明，锰对淋巴细胞内HSPsmRNA表达具有显著影响。其中，低浓度锰可促进HSPsmRNA表达，而高浓度锰则抑制其表达。这些发现有助于深入了解诱导体外鸡脾淋巴细胞HSPsmRNA表达的调控机制，并有望为淋巴细胞保护、免疫调控等方面的研究提供新思路。
关键词：锰；淋巴细胞；HSPsmRNA表达；调控
Abstract:
ThepurposeofthispaperistoexploretheeffectofmanganeseontheexpressionofHSPsmRNAinvitro-inducedchickenspleenlymphocytes.TheresultsshowedthatmanganesehasasignificanteffectontheexpressionofHSPsmRNAinlymphocytes.Specifically,lowconcentrationsofmanganesecanpromotetheexpressionofHSPsmRNA,whilehighconcentrationscaninhibititsexpression.ThesefindingsarehelpfulforadeeperunderstandingoftheregulatorymechanismofinducedinvitroexpressionofHSPsmRNAinchickenspleenlymphocytes,andmayprovidenewideasforresearchonlymphocyteprotectionandimmuneregulation.
Keywords:manganese;lymphocytes;HSPsmRNAexpression;regulation
Introduction:
身体对外源性物质的应激反应是生物体内一个复杂的机制，细胞可以通过激活各种信号通路来应对外界环境的变化。热休克蛋白（Heatshockproteins,HSPs）是一类重要的细胞应激蛋白，参与了维持细胞内稳态、清除异常蛋白和响应细胞外环境释放的信号等多个方面（Srivastava,2002）。
锰是誉为”生命之元素”的微量元素之一，在生物体内发挥了重要的生理和代谢作用。它参与了包括免疫功能、神经学行和骨骼系统在内的许多生物学过程。通过前体蛋白金属结合激酶激活多种转录因子，如核转录因子-κB、Stat3和HIF-1α等，进而影响各种基因表达，从而调节细胞增殖、凋亡和反应性氧物质的产生（林坚,杨旭,柳谋,&张肖,2013）。
一些早期的研究显示，锰可能对热休克蛋白的表达和功能具有重要的影响，但其作用机制尚未得到深入探究（Liu,Wang,Wang,&Xu,2012）。因此，我们对锰对淋巴细胞内HSPsmRNA表达情况进行了研究，以期深入了解锰对细胞应激反应调控的影响。
MaterialsandMethods：
1.细胞培养：
从健康鸡脾脏中分离得到淋巴细胞，其中淋巴细胞数量为1*10^6/mL。细胞在37℃、5%CO2孵育箱中培养。细胞培养基经RPMI1640培养基（Gibco）和10%FBS（Gibco）混合而成。
2.分组：
将淋巴细胞分为对照组（不加锰），低浓度组（2.5mg/mL)，中浓度组(5mg/mL)和高浓度组(10mg/mL)。
3.细胞处理：
在培养基中加入锰，并转移至96孔板中。细胞培养3小时后，取出细胞总RNA。RNA纯化_kit(OmegaBio-Tek)用于提取RNA，首先将细胞分裂液加入总RNA悬液中，然后在96孔板中测量A260/A280比值以评估RNA纯度，最后使用反转录试剂盒（Takara）将RNA转化为cDNA。
4.Real-timeQuantitativePCR:
将cDNA扩增并减少为相应的基因的DNA导数，并使用SYBRGreenI染料与real-timePCR相结合以确定生成的产物数量。HSPsmRNA对β-actin基因的相对表达量按照ΔΔCq法计算。结果由TakaraSYBRPremixExTaqII(Takara)进行分析。
Results:
1.不同浓度锰对细胞存活的影响：
细胞在不加锰、2.5mg/mL、5mg/mL和10mg/mL浓度下分别培养18h，检测各组细胞存活情况,结果发现不同浓度锰可影响细胞存活情况，其中低浓度锰组的细胞存活率高于其他组，高浓度锰组的细胞存活率最低。
2.不同浓度锰对HSPsmRNA表达的影响：
实时荧光定量PCR结果显示，与对照组相比，低浓度锰组的HSPsmRNA表达明显上调(P<0.01)，而高浓度锰组的H