结核分枝杆菌环介导等温扩增实时荧光与反向斑点杂交检测方法的研究-豆柴文库

结核分枝杆菌环介导等温扩增实时荧光与反向斑点杂交检测方法的研究.docx

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结核分枝杆菌环介导等温扩增实时荧光与反向斑点杂交检测方法的研究 Title:ResearchonTuberculosisMycobacteriumBranchingFilamentousBacteriaLoop-mediatedIsothermalAmplificationReal-timeFluorescenceandReverseDotBlotHybridizationDetectionMethods Abstract: Tuberculosis(TB)isaglobalhealthproblemthataffectsmillionsofindividualseachyear.Rapidandaccuratedetectionofthecausativeagent,Mycobacteriumtuberculosis,iscrucialforeffectivediseasemanagementandcontrol.Thisstudyfocusesonthedevelopmentandevaluationoftwodetectionmethods:tuberculosismycobacteriumbranchingfilamentousbacterialoop-mediatedisothermalamplification(TBMBFB-LAMP)real-timefluorescenceandreversedotblothybridization. Introduction: TuberculosisiscausedbyMycobacteriumtuberculosis,whichisinherentlyresistanttomanyantibioticsandisdifficulttoculture.ThecurrentlyavailablediagnosticmethodsforTBincludesmearmicroscopy,culture,andmolecular-basedtechniqueslikepolymerasechainreaction(PCR).However,thesemethodshavelimitationsintermsofcost,infrastructurerequirements,anddetectionsensitivity.Therefore,thereisaneedforrapid,accurate,andcost-effectivediagnosticmethodsforTB. Methods: TheTBMBFB-LAMPreal-timefluorescencemethodandthereversedotblothybridizationmethodweredevelopedbasedontheTBMBFB-LAMPtechnique.TheformermethodamplifiesandmonitorsTBDNAinreal-timeusingafluorescentprobe,whilethelatterdetectsandidentifiesspecificTBDNAsequencesthroughhybridizationwithspecificprobes. Results: TheTBMBFB-LAMPreal-timefluorescencemethodshowedexcellentsensitivityandspecificity,withalimitofdetectionofXXcfu/mLandnocross-reactivitywithnon-TBmycobacteria.ThemethodalsoexhibitedarapiddetectiontimeofXXminutesandcouldbeperformedusingaportablereal-timePCRdevice. Thereversedotblothybridizationmethoddemonstratedcomparablesensitivityandspecificitytothereal-timefluorescencemethod,withalimitofdetectionofXXcfu/mLandnocross-reactivitywithnon-TBmycobacteria.Thehybridizationresultscouldbeeasilyvisualizedusingcolorimetricorchemiluminescentdetectionmethods. Conclusion: TheTBMBFB-LAMPreal-timefluorescenceandrever

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