环介导等温扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌的研究.pdf

中国国境卫生检疫杂志2008年2月第31卷第1期ChineseFrontierHealthQuarantineFeb.2008,Vol31,No.1··7

〔实验研究与疾病监测〕
环介导等温扩增技术检测痰标本中
结核分枝杆菌的研究

易海华1丁永健2钱志娟1房超1吴萍兰1房婷3
(1.徐州出入境检验检疫局技术中心,徐州221002;2.江苏出入境检验检疫局,南京210001;
3.中国矿业大学生物工程系,徐州221006)

摘要〔目的〕寻找1种快速的,且敏感度高,特异性强的结核分枝杆菌的检测方法。〔方法〕环介导等温扩增
基因检测(Loop-mediatedisothermalamplificationLAMP)是一种便捷、灵敏度高而又特异性强的核酸基因扩增检测技
术。本课题组根据结核分枝杆菌gyrB特征性序列设计3对特征性引物对痰液中和培养基中的结核分枝杆菌进行检
测。其中1对环状引物结合于特征性序列中环状结构部分,可极大地加快LAMP反应速度,且不干扰内引物在LAMP
反应中作用。〔结果〕实验结果表明:使用环状引物的LAMP反应可在0.5h内完成,总共分析时间不超过1h。LAMP
检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右,LAMP检测技术具有与实时PCR(Real-timePCR)技术相同的特异
度。另外,由于LAMP检测技术是在恒温的情况下进行,不需要特别昂贵的仪器设备,检测方法简单,结果判定直接。
〔结论〕该方法的特点和优势可以使之在基层实验室及现场监测方面广泛使用,在快速检测方面具有一定的开发潜
力。
关键词结核分枝杆菌;环介导等温扩增;环状引物;链置换
〔中图分类号〕R52〔文献标识码〕B

DetectingMycobacteriumTuberculosisinSputumSpecimensbyTechniqueofLoop-mediatedIsothermalAmplificationYi
Haihua1,DingYongjian2,QianZhijuan1,FangChao1,WuPinglan1,FangTing3.(1.XuzhouEntry-exitInspectionandQuarantineBureau,
Xuzhou221002,China;2.JiangsuEntry-exitInspectionandQuarantineBureau,Nanjing210001,China;3.ChinaUniversityofMining
andTechnology,Xuzhou221006,China)
[Abstract]ObjectiveTofindoutamethodofhighspecificity,efficiencyandrapiditytodetectMycobacteriumtuberculosisin
speutamspecimens.MethodLoop-mediatedisothermalamplification(LAMP)isanovelnucleicacidamplificationmethodinwhich
reagentsreactunderisothermalconditionswithhighspecificity,efficiency,andrapidity.Mycobacteriumtuberculosiscomplexwas
detectedbyLAMPdirectlyfromsputumspecimensandcultureisolatesgrowninaliquidmedium,meanwhile,thespecies-specific
primersweredesignedbytargetingthegyrBgene.AmethodtoacceleratetheLAMPreactionwasdevelopedbyusingadditionalprimers
andtermedloopprimers.Ofwhich,oneloopprimerhybridizedtothestem-loops,exceptfortheloopsthatwerehybridizedbytheinner
primers,andprimestranddisplacementDNAsynthesis.Althoughbothinnerandloopprimersreactedviatheloops,thereactionswere
ofdifferentmechanisms.ResultsThereactiontimebyusingLAMPwithloopprimerswaslessthan0.5hcamparingwiththatofthe
originalLAMPmethod