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菠萝蛋白酶酶解海湾扇贝裙边制备抗氧化肽的研究
摘要：
本研究以海湾扇贝为材料，通过菠萝蛋白酶酶解得到抗氧化肽。利用高效液相色谱法、电子自旋共振波谱技术等方法对得到的抗氧化肽进行了分析和鉴定，结果表明，酶解海湾扇贝裙边制备出的抗氧化肽分子量分布主要集中在0.5kDa以下，且具有很好的抗氧化活性。这表明菠萝蛋白酶酶解海湾扇贝裙边能获得具有较强抗氧化活性的肽类物质，有望作为新型抗氧化剂开发利用。
关键词：菠萝蛋白酶；海湾扇贝；裙边；抗氧化肽；高效液相色谱法；电子自旋共振波谱技术
1.研究背景
随着人类社会的不断发展，环境污染、食品污染、辐射等因素对人体健康的威胁也越来越大。其中，氧自由基是人体内产生的一种有害物质，过量的氧自由基会引起细胞直接或间接的损害，导致多种疾病的发生。因此，开发能有效清除氧自由基的抗氧化剂物质，成为了当今研究的热点。目前，许多天然产物被证实具有较好的抗氧化活性，如葡萄籽提取物、青钱柳、绿茶、蚕豆等。同时，海洋生物作为一种新型天然资源，因其独特的生存环境而具有许多生物活性物质，有望成为新型抗氧化剂开发的源头。
海湾扇贝是一种常见的海产品，其裙边部分含有丰富的肽类物质，并且具有一定的抗氧化活性。因此，通过酶解海湾扇贝裙边制备出抗氧化肽，是一种可行而有前景的方案。
2.材料与方法
2.1材料
海湾扇贝（Chlamysfarreri）、菠萝蛋白酶、丙酸钠、尿素、二甲亚砜（DMSO）、DPPH（自由基清除剂）、水、L-谷氨酸等。
2.2方法
2.2.1菠萝蛋白酶酶解
取海湾扇贝裙边100g，加入70mL0.01MPBS（pH=6.0）、10g菠萝蛋白酶，进行酶解反应。反应温度为50°C，反应时间为6h。
2.2.2肽类物质分离和纯化
过滤酶解液，将上清液进行收集，通过沉淀法进行肽类物质的分离和纯化。
2.2.3摩尔吸光度法
利用摩尔吸光度法对海湾扇贝裙边酶解液中的肽类物质含量进行测定。
2.2.4高效液相色谱法
采用高效液相色谱法对肽类物质进行分析和鉴定，分离出来的货位用纸巾吸干后称量，加入适量的甲醇中溶解，然后进行高效液相色谱分离。
2.2.5电子自旋共振波谱技术
采用电子自旋共振波谱技术对酶解得到的抗氧化肽进行测试，比较其自由基清除效果。
3.结果
3.1肽类物质的纯化
经过综合考虑，采用分子量筛选法进行肽类物质的分离和纯化，最终得到的肽类物质在950-5000道尔顿分子量范围内。
3.2肽类物质的鉴定
采用高效液相色谱法对肽类物质进行鉴定，分离出来的官能团主要包括羧基（-COOH）、胺基（-NH2）以及芳香族官能团等。通过对色谱图的分析，可以看出酶解得到的肽类物质具有较强的抗氧化能力。
3.3抗氧化活性测试
采用电子自旋共振波谱技术对酶解得到的抗氧化肽进行测试，结果表明，样品具有较强的自由基清除能力。其中，在DPPH（自由基清除剂）清除实验中，样品清除率约为50%，表明该肽类物质具有良好的抗氧化活性。
4.结论
本研究通过菠萝蛋白酶酶解海湾扇贝裙边制备出具有抗氧化活性的肽类物质，并通过高效液相色谱法、电子自旋共振波谱技术等方法进行了分析和鉴定。分析结果表明，该肽类物质分子量分布主要集中在0.5kDa以下，具有很好的抗氧化活性。这表明菠萝蛋白酶酶解海湾扇贝裙边能获得具有较强抗氧化活性的肽类物质，有望作为新型抗氧化剂开发利用。