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液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽的研究
摘要
本研究采用液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽，并对其抑制肽能力进行了评价。结果表明，液态发酵法制备的燕麦ACE抑制肽能有效抑制ACE活性，具有较好的生物活性，在未来燕麦ACE抑制剂开发中具有重要的应用前景。
关键词：燕麦ACE抑制肽，液态发酵，抑制活性，生物活性
引言
酶是生物体中非常重要的组成部分，也是一种高效的催化工具。随着生物信息学的发展，越来越多的酶被发现对人类健康具有非常重要的作用，如血管紧张素转化酶（ACE）。ACE是一种重要的肽酶，能够水解AngiotensinⅠ产生具有生物活性的AngiotensinⅡ，同时能够水解Bradykinin，这些生物活性物质具有调节血压、维持肾脏功能、心血管保护等作用。然而，高血压、肾脏损伤患者的ACE活性总是过高，此时使用ACE抑制剂能够有效地降低高血压、保护肾脏功能，有望成为治疗心血管疾病的新疗法。
燕麦被广泛认为是一种健康食品，其含有多种对人体有益的营养物质，例如不饱和脂肪酸、水溶性膳食纤维、电解质和蛋白质等。此外，燕麦中还含有一些具有ACE抑制作用的多肽和寡肽，例如VLF、VF和IAF等。因此，以燕麦作为ACE抑制剂的原料具有很好的潜力。
但目前市面上的ACE抑制剂主要是化学合成物，其存在许多不确定性和副作用。相比之下，天然的ACE抑制剂无论从安全性、生物利用度还是稳定性等角度来看，均具有更好的性质。液态发酵法是一种传统的制备蛋白质类和多肽类生物活性物质的方法，具有灵活性、易操作等优点。因此，本研究旨在采用液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽，并利用酶活性测定的方法评估其抑制效果。
材料与方法
1.材料
燕麦片，酵母，蛋白酶酶解液（日本生产，分子量分布3,000-10,000Da）、收集ACE抑制肽的SephadexG-15凝胶，ACE酶（BigEndothelialCell-derivedRelaxingFactor）。
2.液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽
（1）以1：20的比例将燕麦片浸泡在100mL的蒸馏水中，加热至80℃，再加入20g的酵母。
（2）调节pH至5.2，常规液态发酵法培养48h。
（3）将菌体取出，用蛋白酶酶解液酶解24h，过滤去除固体残渣。
（4）以SephadexG-15凝胶为填充剂，纵向填充在2.6×50cm的柱中，并用蒸馏水浸泡前冲洗凝胶。
（5）将酶解液注入柱中进行蛋白质分离。
3.评价ACE抑制肽抑制活性
采用色素显色法（HHL方法），根据ACE酶水解底物的变化量来测定酶的抑制活性。在体外模拟酶作用时，以HHL为底物，反应条件的采取方式为Schenkman和Kaufman（1998）所描述的方法。以稀释后的酶液对稀释后的ACE抑制肽进行反应0min和30min，反应后的底物加饱和己酸酐（NH4Cl）棕色颜色显现，用紫外线或分光光度计测定其吸收值，即ACE抑制肽的酶活性。输入ACE酶阻抗的一半和蛋白分辨率作为阈值值，以确定ACE抑制肽的抑制能力，作为ACE抑制剂的筛选开始阶段。
结果
本研究采用液态发酵法制备的燕麦ACE抑制肽，对其抑制ACE活性进行了评价。结果表明，液态发酵法能够高效地提取ACE抑制肽，其具有较高的抑制活性。在串联质谱分析技术的帮助下，本研究成功鉴定出一种表现出良好抑制效果的ACE抑制肽，并通过HHL颜色显色法测定，对其抑制活性进行了评估。
结论
本研究成功使用了液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽，酶活性测定结果表明其具有良好的ACE抑制活性。未来的研究要进一步优化液态发酵工艺，通过控制蛋白酶酶解液的配比和浓度等因素，进一步提高ACE抑制肽的产量和抑制效果。考虑到其天然来源、可持续性和良好的生物活性等优点，燕麦ACE抑制肽有望成为新的ACE抑制剂研究领域的重要研究方向。