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毕氏酵母中重组人白介素15的表达纯化及其生物学活性鉴定研究
摘要：
介素15（IL-15）是一种重要的细胞因子，对免疫细胞的发育和具体的免疫反应发挥着关键的作用。本研究利用毕氏酵母表达系统，构建了重组人IL-15的表达质粒，并成功在毕氏酵母中表达纯化。通过SDS-PAGE和Westernblot检测，表明目标蛋白成功表达并具备较高的纯度。进一步的生物学活性检测表明，所表达的重组人IL-15具有官能活性。该研究为进一步探讨IL-15的生物作用和应用提供了良好的基础。
关键词：介素15，毕氏酵母，表达纯化，生物学活性
正文：
引言
介素15（IL-15）是一种会有影响力的细胞因子，是一种相似于IL2的T细胞增生因子，与IL-2相比，IL-15主要在自然杀伤细胞、不成熟的T细胞、淋巴组织机构的终末分化和一些非免疫细胞上表达，同时，IL-15也是一种重要的去处性因子，在T细胞的存活、发育、分化和调节中负责具体的功能。因此，构建IL-15的体外表达系统，对于免疫学的研究有着重要意义。
毕氏酵母，由于其稳定性、快速复制、易于进行基因操纵等优点，是当前最为流行的细胞因子的体外表达系统之一。本实验通过毕氏酵母系统表达纯化重组人IL-15，鉴定其纯度和生物学活性，为进一步探讨IL-15的生物作用和应用提供了良好的基础。
材料和方法
1.质粒构建
重组人IL-15的质粒采用pPICZαA-GFP载体，重组人IL-15基因的序列经过PCR扩增，并与载体进行克隆。
2.酵母的转化和培养
将制备好的质粒转化到毕氏酵母GS115(Invitrogen)中，按照菌落摇床震荡平台法选择高表达菌株。
3.表达和纯化
用BMGY培养毕氏酵母菌株，至OD600达到1.5~2.5时，转化到BMMY培养中，在转化后12小时，增加甲醇量进行诱导，白介素15过表达后从培养基中的细胞外分泌液中提取纯化。
4.蛋白纯化
使用融合蛋白分离纯化技术，利用His-Tag结构与Ni2+亲和层析柱上的结合，纯化获得相关蛋白。
5.蛋白鉴定
用SDS-PAGE对蛋白进行分离，并进行Westernblot检测，检测所获得的蛋白鉴定和检测。
6.生物学活性鉴定
采用MTT法测定其对增殖细胞提取物（SCE）的影响以及体外自然杀伤细胞（NK细胞）跨膜的生长。对IL-15的生物学活性进行了鉴定。
结果和讨论
1.表达纯化
利用pPICZαA-GFP载体在毕氏酵母GS115中表达重组人IL-15。SDS-PAGE和Westernblot分析表明，检测到与分子量为15000的标准蛋白带一致的表达蛋白，且纯度较高，不同于杂交蛋白。
2.生物学活性鉴定
在体外系统中，重组人IL-15对IL-2精化T细胞增殖有显著的增强作用，对MTT法的显着抑制效应，并且促进了NK细胞的跨膜增生，种种结果表明，所制备的重组人IL-15具有很好的生物学活性。
结论
本研究成功地构建了重组人IL-15的表达质粒，采用毕氏酵母表达系统，成功在毕氏酵母中表达纯化，并对其纯度和生物学活性进行了检测。生物学活性检测表明，所表达的重组人IL-15具有官能活性。这为进一步探讨IL-15的生物作用和应用提供了良好的基础。