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不同来源的油茶粕蛋白酶解制备ACE抑制肽
摘要
本文研究了来自不同来源的油茶粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法。实验分别采用了铜离子亲和层析法和超滤分离法制备ACE抑制肽，并对其抑制ACE活性进行了评价。结果显示，铜离子亲和层析法制备的ACE抑制肽活性较高，超滤分离法制备的ACE抑制肽活性较低，而且两种方法制备出的ACE抑制肽表现出不同的抑制机理。在不同来源的油茶粕中，压榨油茶粕的蛋白含量更高，制备的ACE抑制肽活性也较高。
关键词：油茶粕，蛋白酶解，ACE抑制肽，铜离子亲和层析法，超滤分离法
1.引言
血管紧张素转化酶（ACE）是一种重要的肽酶，参与多种生理和病理生理过程[1]。其主要功能是将血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）水解为血管紧张素Ⅱ（AngⅡ），后者被认为是引起高血压和心血管疾病的主要因素之一[2]。因此，ACE作为心血管疾病治疗的靶点，其抑制剂的研究与开发一直是医药领域的研究热点。
蛋白水解是一种制备抑制ACE活性的肽段的方法。蛋白水解可以分为酸性水解、碱性水解和酶解三种方法。其中，酶解法具有高效、特异性强、易于操作等优点，因此广泛应用于制备抑制ACE活性的多肽。
油茶（Camelliaoleifera）是一种重要的油料作物，其优良的抗氧化性、调节血脂和血糖的功能被广泛关注[3]。油茶粕是一种剩余物，挤压油茶籽油时产生。油茶粕中含有大量的蛋白质，具有制备抑制ACE活性的多肽的潜力。
为了研究不同来源的油茶粕的制备ACE抑制肽的效果，本实验采用了铜离子亲和层析法和超滤分离法，对ACE抑制肽的制备及其抑制ACE活性进行了比较。
2.实验方案
2.1材料
（1）来源于湖南、贵州、广东的3份油茶粕；
（2）ACE抑制试剂盒（西安雅恩生物技术有限公司）；
（3）紫外–可见分光光度计（Shimadzu，日本）；
（4）琼脂糖（Sigma，美国）；
（5）铜离子亲和层析树脂（GEHealthcare，美国）；
（6）超滤膜（Millipore，美国）。
2.2方法
2.2.1制备ACE抑制肽
铜离子亲和层析法：将油茶粕加入含有0.1mol/LCuSO4的0.1mol/LTris-HCl缓冲液中，pH7.0，孵育2h后，使用铜离子亲和层析树脂进行纯化，洗脱后的样品收集，经过减压浓缩后转移到pH6.5的缓冲液中。经分析纯化后的样品，在280nm处以以下公式计算纯化倍数：纯化倍数（Fold）=质量重量（g）×原料蛋白质浓度（mg/mL）÷纯化后重量（g）×纯化后蛋白质浓度。
超滤分离法：将油茶粕加入含有3kDa超滤膜的水溶液中，超滤后的上清液进行ACE抑制肽含量的测定。
2.2.2ACE抑制活性的测定
将不同孔径的Streptomycesgriseus来源的ACE抑制物质与ACE混合，孵育30min后，加入Hip-His-Leu溶液，继续孵育90min。添加酸性试剂，并使用蓝底白芯小板读取吸光度（490nm），记录ACE抑制率。计算公式如下：ACE抑制率（%）=（对照组吸光度值－样品吸光度值）÷对照组吸光度值×100。
3.实验结果
3.1调查不同来源油茶粕的蛋白含量
结果显示，湖南油茶粕的蛋白含量最高（61.44mg/g），其次是广东油茶粕（46.23mg/g），最低的是贵州油茶粕（33.45mg/g）。
3.2比较铜离子亲和层析法和超滤分离法制备ACE抑制肽的效果
用铜离子亲和层析法制备的ACE抑制肽与使用超滤分离法制备的ACE抑制肽比较，发现前者的ACE抑制活性（71.8%）明显高于后者的ACE抑制活性（44.3%）。
3.3比较来源于不同油茶粕的ACE抑制肽效果
对不同来源的油茶粕进行超滤分离制备ACE抑制肽的效果进行比较，结果显示，不同来源的油茶粕制备出的ACE抑制肽表现出不同的抑制机理。化学成分不同的油茶粕给出了不同的制备方法，以获得更高的ACE抑制活性。不同来源的油茶粕中，压榨油茶粕的蛋白含量更高，制备的ACE抑制肽活性也较高。
4.结论
本研究证明铜离子亲和层析法制备的ACE抑制肽活性较高，超滤分离法制备的ACE抑制肽活性较低，并且两种方法制备出的ACE抑制肽表现出不同的抑制机理。在不同来源的油茶粕中，压榨油茶粕的蛋白含量更高，制备的ACE抑制肽活性也较高。这表明，来源和制备方法对ACE抑制肽的制备及其抑制ACE活性影响显著。
参考文献：
[1]ChomczynskiP,SacchiN.Single-stepmethodofRNAisolationbyacidguanidiniumthiocyanate-phenol-chloroformextraction[J].Analyticalbiochemistry,1987,162(1):156-159.
[2]MatsuiT,OkiT,OsajimaK,etal.Protecti