一种杜仲籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103320488103320488B(45)授权公告日2014.11.26(21)申请号201310286294.4(22)申请日2013.07.08(73)专利权人吉首大学地址416000湖南省吉首市人民南路120号(72)发明人黄群麻成金杨志伟彭勉芳唐谦为王珏(51)Int.Cl.C12P21/06(2006.01)C07K1/34(2006.01)审查员刘婷权权利要求书1页利要求书1页说明书4页说明书4页附图1页附图1页(54)发明名称一种杜仲籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法(57)摘要本发明公开了一种杜仲籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法，该方法步骤如下：杜仲籽粕蛋白粉溶解于去离子水，配置成蛋白液；蛋白液置于恒温水浴锅中，对蛋白质进行热变性处理；变性处理后溶液冷却至室温，用1mol/LNaOH调节pH值；加入碱性蛋白酶，溶解并混合均匀；加酶后蛋白液置于恒温水浴锅中，酶解；酶解完成后升高水浴温度，酶解液加热，使蛋白酶变性失活，终止酶解反应；酶解液冷却至室温，于台式高速离心机离心，倾取上清液；上清液经超滤，滤过液经真空冷冻干燥即得ACE抑制肽粉末产品。本发明操作方法简单，将杜仲翅果蛋白转变为分子质量更小的功能肽。此外，本发明方法制备的ACE抑制肽对高血压患者有降压作用，而对血压正常者无影响，具有良好的发展前景。CN103320488BCN103248BCN103320488B权利要求书1/1页1.一种杜仲籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，该方法步骤如下：杜仲籽粕蛋白粉溶解于去离子水，配置成蛋白液；蛋白液置于恒温水浴锅中，对蛋白质进行热变性处理；变性处理后溶液冷却至室温，用1mol/LNaOH调节pH值；加入碱性蛋白酶，溶解并混合均匀；加酶后蛋白液置于恒温水浴锅中，酶解；酶解完成后升高水浴温度，酶解液加热，使蛋白酶变性失活，终止酶解反应；酶解液冷却至室温，于台式高速离心机离心，倾取上清液；上清液经超滤，滤过液经真空冷冻干燥即得ACE抑制肽粉末产品；酶解杜仲籽粕蛋白制备ACE抑制肽采用胃蛋白酶；超滤膜截留的分子量为2000；蛋白液的质量浓度为5.0％；蛋白液置于80-90℃恒温水浴锅中加热10min；用1mol/LNaOH调节pH值为9.5-10.5；按11000-12000U/g酶用量加入碱性蛋白酶；加酶后蛋白液置于45-50℃恒温水浴锅中酶解2.5-3.0h；酶解液于90-100℃加热10min；高速离心机中4000-4500r/min离心10min，倾取上清液。2CN103320488B说明书1/4页一种杜仲籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法技术领域[0001]本发明属于ACE抑制肽制备领域，尤其涉及一种杜仲籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法。背景技术[0002]杜仲(EucomMol/LiaUlmoidesOliv)是我国特有的名贵中药材和经济树种，主要分布在湖南、湖北、陕西、四川、重庆、贵州等西部省市，武陵山区建有规模化的杜仲商品生产基地，仅湖南西部地区就有杜仲40万亩，成片20余万亩，开发应用前景十分广阔。长期以来，对杜仲的利用仅仅限于杜仲皮，杜仲果实为翅果，扁平，蛋白质含量约15％，含有18种氨基酸，其中人体必需氨基酸齐全且占总氨基酸含量的32.3％，谷氨酸含量最高。[0003]心脑血管疾病已成为危害人类健康的头号杀手，而高血压是最常见的心血管疾病之一。中国是高血压病高发的国家之一，2012年我国成人高血压患病率为18.6％，患者数量达1.6亿，且每年近100万患者因此病而死亡。高血压成为继肿瘤之后的第二个威胁人类健康的慢性疾病，如何预防和治疗高血压己成为全社会共同关注的焦点。[0004]目前，对于高血压病多是采用合成的ACE抑制剂作为主要的治疗药物，但存在副作用明显、长期服药导致依赖性等不安全因素。因此，寻找安全性高、降血压效果好的ACE抑制剂已成为国内外研究者所关注的重要课题。[0005]食物蛋白质是人体新陈代谢过程中极为重要的营养物质，具有提供构成机体所需氨基酸和能量供应等功能。有关研究表明，以数个氨基酸结合而成的功能肽具有比游离氨基酸更好的消化吸收性能；功能肽还有原蛋白质或其组成氨基酸所没有的广泛的生理调节功能，如促进钙吸收、降血压、降低胆固醇、免疫调节等，特别是具有降血压活性的ACE抑制肽成为生物活性肽研究领域的热点之一。[0006]血管紧张素转化酶(AngioensinConvertingEnzyme，ACE，EC3.4.15.1)是一种含锌的二肽羧酶，能被氯离子激活并具有较宽的底物特异性。ACE广泛分布于哺乳动物的组织中，尤其在血管内皮细胞、上皮吸收细胞、神经上皮细胞及雄性生殖细胞中，A