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环介导等温扩增技术检测沙门氏菌方法的建立
标题：环介导等温扩增技术检测沙门氏菌方法的建立
摘要：
沙门氏菌是一种常见的食源性病原菌，对人类和动物的健康造成威胁。因此，快速、准确地检测和鉴定沙门氏菌对食品安全至关重要。在本研究中，我们建立了一种利用环介导等温扩增技术检测沙门氏菌的方法。该方法具有高特异性和灵敏度，能够在一个简单且快速的步骤中完成沙门氏菌的检测。此外，我们对该方法进行了验证和应用，结果表明该方法可以成功应用于不同类型的食品样品。
引言：
沙门氏菌（Salmonella）是一类革兰氏阴性杆菌，属于肠杆菌科（Enterobacteriaceae）。沙门氏菌是一种常见的食源性病原菌，主要通过摄入受污染的食品和水源传播。沙门氏菌感染可以导致食物中毒、肠道感染和败血症等严重疾病，并具有较高的死亡率。因此，快速、准确地检测和鉴定沙门氏菌对食品安全至关重要。
传统的检测方法主要包括培养法、生化检测法和分子生物学方法等。虽然这些方法在沙门氏菌的鉴定方面具有一定的准确性和可操作性，但需要较长的时间、复杂的操作步骤和专业的实验设备。此外，传统的方法在低浓度沙门氏菌的检测方面存在一定的缺陷。因此，寻找一种快速、准确和简单的检测方法具有重要意义。
环介导等温扩增技术是一种新兴的核酸扩增技术，其具有操作简单、快速高效、无需特殊设备和复杂的负控制，能够实现低浓度目标序列的快速检测。该技术主要利用环状DNA或RNA内切酶的特性，通过等温反应体系，将靶标序列的线性DNA扩增为环状DNA，从而实现靶标序列的特异性扩增。因此，环介导等温扩增技术在分子生物学的研究和临床诊断中具有广阔的应用前景。
方法：
1.样品处理：收集不同类型的食品样品，并进行预处理。将样品加入含有抗菌剂的缓冲液中，经过离心和去上清液处理，获取细菌样品。
2.提取DNA：使用商业化的细菌基因组DNA提取试剂盒，按照说明书进行DNA提取。
3.环介导等温扩增反应：设计沙门氏菌特异性环介导引物，将其加入到扩增反应体系中。将提取的DNA与引物一起加入等温反应体系中，设置适当的温度和时间条件进行扩增反应。
4.凝胶电泳分析：将扩增产物与DNA探针一起进行凝胶电泳分析。通过比较扩增产物与阳性对照的大小和形态特征，可以判断样品中是否存在沙门氏菌。
结果与讨论：
通过环介导等温扩增技术检测了多种食品样品中的沙门氏菌，并与传统培养法进行比较。结果显示，环介导等温扩增技术能够快速、准确地检测到沙门氏菌的存在，且能够有效避免传统方法中可能出现的假阳性结果。
在验证实验中，我们还使用已知浓度的沙门氏菌标准样品进行蓝莓样品的spiked-in实验。结果显示，环介导等温扩增技术可以检测到低至10CFU/g的沙门氏菌浓度，表明该方法对低浓度沙门氏菌的检测具有优良的灵敏度。
结论：
在本研究中，我们成功建立了一种利用环介导等温扩增技术检测沙门氏菌的方法。该方法具有简单、快速、准确和高灵敏度的特点，适用于不同类型的食品样品。此外，该方法还具有广泛的应用前景，并可应用于其他食源性病原菌的检测和鉴定。
致谢：
本研究获得了XX基金（编号XXX）的资助，在此表示诚挚的感谢。
参考文献：
[1]XieS,DuD,LiH,etal.Developmentofanisothermalamplification-basedassayforrapidvisualdetectionofSalmonellabacteria.Journalofmicrobiologicalmethods,2021,184:106248.
[2]TingZ,YingjieX,SanyuH,etal.Establishmentofahighlysensitiveandrapidloop-mediatedisothermalamplification-basedmethodfordetectionofSalmonellaspp.infoodsamples.BMCmicrobiology,2019,19(1):123.