真核生物基因组DNA的提取、电泳ppt课件.ppt

分子生物学实验考试形式实验课安排实验课安排一、加样器的使用及注意事项
1、用途
2、使用练习：加样器读数为100，实际体积各为多少?实验一、真核生物基因组DNA的提取和电泳一、实验背景掌握小鼠肝脏组织模板DNA的提取技术。
学习DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和技术。注意事项：
离心时离心机内样品平衡后对称放置
加样器加样准确。一、核酸提取的主要步骤乙醇沉淀作用：a.阴离子型去污剂，溶解细胞膜、核膜上脂质成分
b.使蛋白质变性
c.将细胞膜、核膜破坏；对核酸酶有抑制作用重蒸酚:酚的作用是变性蛋白质，而对DNA结构没有影响。
无色
酚的氧化产物(如醌等,粉红色)破坏磷酸二脂键。
重蒸酚是将酚中的酚的氧化产物去除。

TE溶液:Tris-HCl10mM(pH:8.0)
EDTA.Na21mM(pH:8.0)
作用：提供略碱的pH值，保证DNA溶于水相。
在酸性条件下，DNA分配于有机相。

8-羟基喹啉：0.1%黄色酚相指示剂抗氧化剂氯仿作用：
a.氯仿的变性作用不如酚好，
但与酚共同/交替使用可增强去蛋白效果；
b.氯仿有加速有机相和水相的分离、
去除植物色素和蔗糖、抑制核酸酶活性；在单价阳离子存在的情况下，乙醇可以使DNA发生沉淀。1、加入580ul(等体积)TE饱和酚,混匀1min.10000rpm,2min。
(注意抽取下层酚相;轻柔混匀，避免DNA链断裂;)
注意事项：

1）本实验将用到的TE饱和重蒸苯酚、氯仿/异戊醇是有机试剂，比水的比重大，而DNA溶解在水里，我们总是取上清。
；
2）在抽取完苯酚、氯仿等有机试剂，不能将加样器平放或倒置，以防液体导流损坏加样器，加完样后立即弃掉加样器头。
。
3）基因组DNA由于太大，非常容易受机械剪切而断裂，因此，为了得到完整的基因组DNA，尽量不要多次进行物理性操作。实验第三部分、DNA质量检测--琼脂糖电泳2.上样：
在样品中加1ul10×上样液，混匀，加入上样内．
各组按顺序上样三、琼脂糖凝胶电泳常用试剂线性DNA片断大小（kb）琼脂糖浓度（%）
5–600.4
0.8–100.7
0.4–61.0
0.2–41.5
0.2–31.75
0.1–32.0五、电泳仪的使用方法六、预期结果思考题：

1.本实验中所用到的各试剂的作用是什么?
蛋白酶K,SDS,TE饱和酚，氯仿,乙醇,EDTA

2.DNA提取过程中有哪些注意事项？实验结束后整理实验台,值日生值日!