甾体激素类药物的分析专家讲座.pptx

第十章
甾体激素类药品分析概述甾体激素类药品均含有环戊烷骈多氢菲母核，基本骨架为：一、肾上腺皮质激素结构特点：
①A环3位为羰基、4，5位间为双键，形成共轭体系，标识为：Δ4-3-酮基（又称α、β不饱和酮结构），或写成:Δ4-C3=O；
②C环11位上有羰基或羟基；
③D环17位上有α-醇酮基侧链（），而且多数还具α-羟基。二、雄性激素及蛋白同化激素
（1）临床惯用雄性激素为睾丸素（睾酮）衍生物，如丙酸睾丸素、苯乙酸睾丸素。
（2）惯用蛋白固化激素有苯丙酸诺龙（苯丙酸去甲睾酮）、康力龙、康复龙等。（1）结构特征（两种激素之共同点）：
①A环3位Δ4-3-酮基（又称α、β不饱和酮结构）；
②D环17位上无侧链，多为羟基。（三）孕激素
又称黄体素或孕酮，临床上主要为黄体酮、己酸孕酮、安宫黄体酮和甲地孕酮等。
①A环Δ4-3-酮基（α、β不饱和酮结构）；
②D环17位上有甲基酮，有些含有羟基；（四）雌激素
临床上惯用雌二醇及其各种酯和炔雌醇及其衍生物，以及活性雌酮、雌三醇等。
①A环为苯环，3位上有酚羟基，10位无角甲基；
②D环17位上有羟基或羰基，有还有乙炔基。第二节判别试验（二）官能团反应
1、C17－α－醇酮基反应
皮质激素C17-α-醇酮基含有还原性，能与许多氧化剂，如氨制AgNO3、斐林试剂、四氮唑盐反应。其中以四氮唑盐显色反应最为惯用，不但可用作层析法显色剂，还可用于含量测定。1、与碱性酒石酸铜试液反应
铜（Ⅱ）在碱性条件下可被还原物质还原为红色氧化亚铜沉淀。如：中国药典判别氢化可松2、与氨制硝酸银试液反应
银（Ⅰ）在碱性条件下可被还原物质还原为黑色金属银沉淀。如：中国药典判别醋酸去氧皮质酮3、与碱性四氮唑盐显色反应
氯化三苯四氮唑（或蓝四氮唑）在碱性条件下可被还原物质还原为红色单甲鐕（或蓝色双甲鐕）。2、酮基呈色反应
机理：分子中C3=O和C20=O能与普通羰基试剂如：2，4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼等显色。主要是C3=O与异烟肼缩合生成异烟腙而呈黄色。盐酸酸性条件下：
Δ4-3＝O：即刻反应
Δ1，4-3＝O：1～3min
C20＝O：长时间3、甲酮基或活性亚甲基反应
含H3C-C=O（甲酮基）和活性亚甲基激素类药品与亚硝基铁氰化钠、芳香醛、间二硝基苯反应呈色。
（1）甲酮基呈色反应：
如黄体酮蓝紫色，其它甾体呈淡橙色或不显色。（专属反应）（2）亚甲基反应：
如硫酸普拉睾酮
紫红色
4、酚羟基呈色反应：A环为苯环雌激素+重氮苯磺酸盐红色偶氮染料。
比如：5、炔基沉淀反应
含炔基甾体激素，如炔雌醇、炔诺酮，遇硝酸银试液，即生成白色炔雌醇银盐沉淀及白色炔诺酮银沉淀。
6、卤素反应（有机氟呈色反应）
一些含有氟甾体激素药品（如醋酸氟轻松、醋酸地塞米松等），以氧瓶燃烧后生成无机氟化物，再与茜素氟蓝及硝酸亚铈起呈色反应。（一）缩氨基脲生成
如苯丙酸诺龙（甾酮）+缩氨脲
苯丙酸诺龙缩氨脲三、紫外分光光度法
一些甾体激素药品分子中存在
和共轭系统，在紫外光区有特征吸收。四、红外吸收光谱六、高效液相色谱法
在一定色谱条件下，比较甾体激素样品与其对照品峰保留时间进行判别。普通都要求在含量测定项下高效液相色谱图中，供试品峰保留时间进行应与对照品峰保留时间一致。第三节特殊杂质检验一、其它甾体检验
我国药典和一些国家近版药典，采取TLC法或HPLC法检验甾体激素类药品中“其它甾体”。因为该法含有简便、快速、灵敏、分离效果好等优点，而广泛用于甾体激素药品判别、检验结构相同杂质等质量控制方法。
采取高低浓度对比法进行，即供试液与对照液均为同一物，但仅浓度有所不一样。详见P251~252。
结果判断：中国药典正文中对供试品要求了杂质斑点数目和每个杂质斑点不得超出限量。第四节含量测定一、高效液相色谱法
各国药典采取反相高效液相法测定，方法普通为内标法。填充剂为十八烷基硅烷化键合硅胶；流动相多为甲醇-水、乙腈-水-异丙醇、甲醇-四氢呋喃-水等混合溶剂；检测器均为紫外光检测器，检测波长为240nm或254nm。
为了提升分离效率、取得满意峰形，有时在流动相中加入醋酸缓冲液或磷酸缓冲液调整流动相pH值。二、紫外分光光度法1、方法原理
甾体激素C3上酮基及一些其它位置上酮基都能在酸性条件下与羰基试剂如异烟肼、2，4-二硝基苯肼及氨基脲等起缩合反应，可作为含量测定依据。异烟肼是当前广泛采取一个，异烟肼（INH）试剂可与一些甾酮在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波优点含有最大吸收。一些含有△4-3-酮和C20－酮基甾体激素可形成双腙，如黄体酮、可松、氢化可松等。
（二）测定方法
分别制备供试品、对照品溶液，再分别与异烟肼溶液反应，在420nm波优点罚别测定吸收度并计算结果。反应原理
皮质激素C17-α-醇酮基含有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还