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第二章核酸结构和功效StructureandfunctionofNucleicAcid核酸(nucleicacid)核酸种类、分布和功效第一节核酸化学组成及一级结构核酸核苷酸组成及结构 磷酸 戊糖 碱基NNβ-D-2-核糖O戊糖碱基核苷酸名称中缩写符号DNA、RNA组成异同O功效 能量物质ATP(能量“货币”)UTP(糖合成) GTP(蛋白质和嘌呤合成)CTP(磷脂合成) 合成核酸原料NTP(RNA)dNTP(DNA)3、含核苷酸生物活性物质FAD二、DNA和RNA是多聚核苷酸(polynucleotides)5′-磷酸端(惯用5′-P表示); 3′-羟基端(惯用3′-OH表示) 核苷酸链含有方向性,当表示一个核苷酸链时,必须注明它方向是5′→3′或是3′→5′。 概念:组成核酸核苷酸或脱氧核苷酸从5’-末端到3’-末端排列次序,也就是核苷酸序列(nucleotidesequence)。也即碱基序列(basesequence)。核酸分子一级结构表示方法有三种:戊糖一、核酸基本结构单位:核苷酸(nucleotide)核苷酸连接方式:3,5磷酸二酯键一、DNA二级结构1950年前后,ErwinCharggff等人采取纸层析及紫外吸收技术测定了各种生物体DNA碱基组成。 不一样起源DNA碱基组成(摩尔%) DNA起源腺嘌呤胸腺嘧啶鸟嘌呤胞嘧啶 人30.430.119.619.9 绵羊23.928.721.120.9 公牛29.028.721.221.2 大鼠28.628.421.420.4 母鸡28.028.422.021.6 大肠杆菌24.723.625.725.72、Charggff标准: 全部DNA分子中,A%=T% G%=C% (嘌呤碱摩尔数=嘧啶碱摩尔数) 有种属特异性:不一样生物DNA碱基组成不一样 同一生物体DNA碱基组成没有组织器官特异性 这预示着碱基互补配正确可能性,即A与T配对,G与C配对。DNA分子 X射线衍射照片4、DNA双螺旋结构模型(double-helicalstructure)1、螺旋中两条链反向平行,即其中一条链方向为5′→3′,而另一条链方向为3′→5′,两条链共同围绕一个假想中心轴呈右手双螺旋结构。亲水磷酸、戊糖为骨架,疏水碱基向内;2、碱基对互补,碱基之间氢键连接,A=T,G=C;每个碱基对处于同一平面,碱基平面垂直于中心轴; 因为几何形状限制,碱基对只能由嘌呤和嘧啶配对,即A与T,G与C。这种配对关系,称为碱基互补。A和T之间形成两个氢键,G与C之间形成三个氢键。 碱基配对和氢键形成3、双螺旋横截面直径约为2nm,相邻两个碱基平面之间距离(轴距)为0.34nm,每10个核苷酸形成一个螺旋,其螺距(即螺旋旋转一圈高度)为3.4nm。氢键维持DNA双链横向稳定性, 碱基堆积力维持双链纵向稳定性(主要)。其它螺旋形式小结(2)碱基互补配对:AT配对(两个氢键),GC配对(三个氢键);碱基对平面垂直纵轴超螺旋结构(superhelix或supercoil) DNA双螺旋链深入盘曲所形成构象即超螺旋结构。正超螺旋(positivesupercoil)--右手超螺旋 盘绕方向与DNA双螺旋方向相同(一)原核生物DNA结构(二)真核生物细胞中DNA组装核小体结构关键颗粒 2(H2A·H2B·H3·H4)染色质纤维人类46条染色体DNA总长可达1.7m,经过螺旋化压缩,实际总长只有200nm。RNA种类、分布、功效(一)RNA一级结构二、信使RNA(messengerRNA,mRNA)真核细胞 基因结构与蛋白质合成正确起始相关。三、转运RNA(transferRNA,tRNA)DHU环tRNA“倒L”型三级结构四、核糖体RNA(ribosomalRNA,rRNA)21种五、snmRNA参加基因表示调控(smallnon-messengerRNA)六、核酸在真核与原核细胞中不一样时空特征紫外吸收 变性、 复性与杂交 一、核酸紫外吸收260nm依据A260/A280比值判断核酸样品纯度二、DNA变性(denaturation)变性后其它理化性质改变:在DNA双螺旋结构中碱基藏入内侧,变性时DNA双螺旋解开,于是碱基外露,碱基中电子相互作用更有利于紫外吸收,故而产生增色效应。更具经典意义8090100影响Tm值原因2、核酸分子长度三、核酸复性与分子杂交 将不一样种类DNA单链或RNA放在同一溶液中,只要2种单链分子间存在着一定程度碱基互补配对关系,就可能形成局部双链,即所谓杂化双链(heteroduplex)。这种现象叫杂交或核酸分子杂交。探针(probe):采取同位素或其它发光物质标识一小段已知序列核酸,经过杂交反应就能够确定待测序列中是否含有与其相同序列。这段已知序列核酸称为探针。 DN