免疫学检测技术及在食品中的应用ppt课件.ppt

第4章第2讲免疫学检测技术及在食品安全中的应用1酶免疫技术——ELISA检测技术ELISA可检测标本类型广泛

体液：血清、血浆、胸腹水、灌洗液、脑脊液
分泌物：唾液
排泄物：尿液、粪便等
细胞培养上清
组织匀浆1.1ELISA的发展历程
ELISA是一种免疫测定技术：基于抗原抗体反应
酶联：抗原或抗体的酶标记
吸附：抗原或抗体的固相化
测定：加入酶反应的底物后，被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，采用酶标仪进行测定

间接法
夹心法
竞争法
捕获法
间接法——测抗体

夹心法——测抗原

产品举例竞争法——测小分子抗原
1.4操作流程将抗原或抗体固定在固相载体上的过程称为包被(coating)。
蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用。
大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。
包被的条件（2）封闭（3）加样（4）保温（5）洗涤(6)显色酶底物OPD氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反应后，在492nm处有最高吸收峰，灵敏度高
TMB经HRP作用后共产物显蓝色。TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H2O2溶液混和即成应用液。酶反应终止后，TMB产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为450nm。
1.5ELISA影响因素2免疫胶体金技术2.1简介胶体金（Colloidalgold）是氯金酸（HAuCl4）的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。故称胶体金胶体金标记的原理：
胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团静电吸引而形成牢固结合。
胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中
2.2胶体金试纸条诊断技术的原理2.3分类44（2）思考2.4胶体金快速诊断技术的特点2.5技术分项（1）金标垫与样品垫的处理抗体Antibody（3）标记技术Conjugate（4）胶体金制作流程（5）溶液喷点---喷点溶液Dispensing(BIODOTXYZ系列喷点仪器)（6）装配\切条\包装Lamination（7）灵敏度问题（8）长期保存（9）实验研究的时间安排Developing发展方向标记技术的探索
顺磁粒子标记、量子点标记

免疫反应信号转化为电子信号模式

新的层析模式

生物传感器