细胞表面分子的检测与分析.ppt

本次实验课流程医学结构生物学研究中心
柳卫凰流式在细胞表面分子检测中的应用标本来源标本制备标本制备四、贴壁细胞单细胞悬液的制备
（1）将培养细胞用0.04％EDTA或0.25％胰酶消化3～7分钟，
至光镜下见到贴壁细胞变圆还没有漂浮为止，弃消化
液，加PBS；
（2）用吸管将细胞从瓶壁上轻轻吹打下来，移入离心管中；
（3）离心，1000r/min，5min；
（4）加PBS洗两遍；
（5）PBS重悬，将细胞吹打均匀；
（6）荧光标记。标记方法对照设置同型对照（IsotypeControl）双色标记荧光补偿荧光补偿对照注意事项样本的采集样本的储存样本的染色溶血，即裂解红细胞。它是流式细胞术分析白细胞的先决条件。溶血不好，白细胞群不能很好分开，溶血好坏直接影响检测结果。因此，必须对溶血过程进行严格控制。
结语常用的荧光染料参考书籍实验：人外周血T淋巴细胞亚群的检测与分析淋巴细胞T淋巴细胞(CD3+)活化T淋巴细胞1.取新鲜抗凝血100ul，置于FCM测量管中；
2.直接标记法：加入带荧光标记抗人的单克隆抗体10ul，充分混匀，4℃闭光孵育20～30min;
3.加入溶血剂A液600ul,轻轻振荡15s,
加入溶血剂B液260ul,轻轻振荡15s，
加入溶血剂C液100ul,振荡10s,上机检测。
ACK溶血剂:加入2mlACK溶血剂，充分混匀，反应5min,1000r/min离心5min，去上清；重复一遍，用PBS洗涤1遍，收集细胞上机检测。ABC溶血剂配方ACK溶血剂配方实验分组荧光补偿“A门”内CD3/CD4的表达“A门”位置变化引起的改变“A门”位置变化引起的改变小鼠脾细胞CD3+/CD4+的表达思考题、实验报告