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高速逆流色谱分离制备甘草抗血管生成活性成分的研究
摘要
本研究以甘草作为研究对象，通过高速逆流色谱分离制备甘草抗血管生成活性成分，并研究其生物活性。首先将甘草采用氯仿提取，利用高速逆流色谱进行分离纯化，得到甘草抗血管生成活性成分。将该成分进行生物活性测试，结果表明，该成分具有很好的抑制血管生成的能力。本研究的结果表明，高速逆流色谱分离技术可以成功地分离纯化甘草中的活性成分，为进一步研究甘草的功效和安全性提供了实验依据。
关键词：高速逆流色谱；甘草；抗血管生成活性成分；生物活性测试
Abstract
Inthisstudy,licoricewasusedastheresearchobjecttoprepareanti-angiogenesisactiveingredientsfromlicoricebyhigh-speedcountercurrentchromatographyandtostudyitsbiologicalactivity.First,licoricewasextractedwithchloroformandpurifiedbyhigh-speedcountercurrentchromatographytoobtainlicoriceanti-angiogenicactiveingredients.Thebiologicalactivityoftheingredientwastested,andtheresultsshowedthatithadagoodabilitytoinhibitangiogenesis.Theresultsofthisstudyindicatethathighspeedcountercurrentchromatographycansuccessfullyseparateandpurifyactiveingredientsfromlicorice,providingexperimentalevidenceforfurtherstudiesoftheefficacyandsafetyoflicorice.
Keywords:highspeedcountercurrentchromatography;licorice;anti-angiogenesisactiveingredient;biologicalactivitytest
绪论
甘草是一种历史悠久的中药材，具有止咳化痰、滋润肺燥、消肿解毒、解热镇痛等功效。除此之外，甘草还具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化和抗菌等多种生物活性。其中，抗血管生成活性是甘草的一项重要生物活性，在很多医学领域中具有广泛应用。
高速逆流色谱是一种基于分离剂流动状态的连续平衡分离技术，具有相对分离度高、峰形好、分离纯度高等优点。因此，本研究采用高速逆流色谱技术进行甘草抗血管生成活性成分提取和纯化。
材料与方法
1.材料
本实验使用的材料有：甘草、氯仿、甲醇、水。
2.方法
（1）甘草氯仿提取
将甘草粉末，加入氯仿中并回流提取4h。用干净的滤纸对提取液进行过滤，去除残渣，然后蒸发过剩氯仿，获得甘草氯仿提取物。
（2）高速逆流色谱分离制备甘草抗血管生成活性成分
将甘草氯仿提取物溶于甲醇：水（4:1）的混合溶剂中，搅拌使其溶解均匀后，进行高速逆流色谱分离，其中采用正相高速逆流色谱进行分离，以实验室自行制作的K1-K2萃取柱为分离磁盘，采用偏正辛醇-甲醇-水（4:2:5）作为流动相。采用制备式进行分离和纯化，得到甘草抗血管生成活性成分。
（3）生物活性测试
使用大鼠主动脉内膜细胞（RMArterialsmoothmusclecell,RMAs）进行生物活性测试，采用MTT比色法进行测定细胞增殖速率，绘制实验曲线，判断样品的生物活性。
结果与分析
（1）高速逆流色谱分离制备甘草抗血管生成活性成分
通过高速逆流色谱分离得到甘草抗血管生成活性成分，分离效果如图1所示。
图1高速逆流色谱分离甘草抗血管生成活性成分
（2）生物活性测试
将甘草抗血管生成活性成分加入RMAs细胞培养基中，测定细胞增殖的速率，结果如图2所示。
图2甘草抗血管生成活性成分对RMAs细胞增殖的作用
从图2中可以看出，随着样品浓度的增加，细胞增殖速率明显下降，说明甘草抗血管生成活性成分对RMAs细胞具有抑制作用。
结论
通过本研究，成功地利用高速逆流色谱技术分离纯化出甘草中的抗血管生成活性成分，并进行了生物活性测试。结果表明，该成分具有很好的抑制血管生成的能力。这为甘草的进一步研究提供了实验依据，同时也展示了高速逆流色谱技术在中药提取和纯化方面的应用前景。