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马尾松花粉多糖的分离纯化、结构表征及其活性研究
摘要：
本文以大豆异黄酮为控制组，采用水浸提、乙醇沉淀、DEAE-52离子交换柱等分离纯化方法，从马尾松花粉中成功分离纯化出一种多糖，经UV、FT-IR、GC-MS等多种手段鉴定了该多糖为β型-D-苷聚糖。进一步地，本文研究了马尾松花粉多糖对巨噬细胞RAW264.7活性的影响，结果表明该多糖能够显著促进巨噬细胞的细胞周期，提升其吞噬能力，表明该多糖具有一定免疫调节、抗病毒和抗癌的潜在作用。
关键词：马尾松花粉，多糖，纯化，结构表征，活性研究
一、引言
马尾松是我国南方草木丛林中常见的一种大乔木，其花粉富含多种生物活性成分，在民族医学、食品和医药领域有着广泛的应用。尤其是马尾松花粉中的多糖具有较强的生物活性，广泛应用于免疫调节、抗病毒、抗癌和保健等方面。但目前对马尾松花粉中多糖的分离、纯化、结构鉴定以及活性研究还存在一定的不足和局限性。
因此，本文旨在采用水浸提、乙醇沉淀、DEAE-52离子交换柱等方法从马尾松花粉中分离纯化多糖，并通过FT-IR、GC-MS等分析工具对其结构进行表征，同时研究其对巨噬细胞活性的影响，为进一步开发利用马尾松花粉多糖提供一定的理论和实践参考。
二、材料与方法
2.1材料
马尾松花粉，醋酸多聚半乳糖（VPG），大豆异黄酮（GEN），MTT试剂，FBS，溶血溶液，ISO-83蛋白质染色试剂盒等。
2.2方法
2.2.1马尾松花粉的提取
将干燥的马尾松花粉粉末加入足量的蒸馏水中，经过30min振荡，即取下上清液。将上清液过滤后放入由乙醇制成的沉淀液中，经离心沉淀后用蒸馏水清洗，即可得到马尾松花粉的提取液。
2.2.2多糖的提取
将马尾松花粉提取液中的杂质去除后，将其分别以乙醇为沉淀液加入四倍体积乙醇溶液中，沉淀后加入纯水悬浮。将其吸附树脂DEAE-52浆糊均匀充分的打入色谱柱中，以大豆异黄酮（GEN）作为控制组，以0.5M的盐度梯度逐步淋洗，得到各组的多糖提取物后再以纯水淋洗，最后用紫外分光光度计SpectroUV-2550进行检测。
2.2.3多糖的结构表征
对分离得到的多糖进行FT-IR的分析，记录不同波长下最大吸光度，初步鉴定其化学组成、结构式和性质等特性。另外，还用GC-MS对其有机质成份进行分析。
2.2.4多糖的活性研究
将多糖和巨噬细胞RAW264.7细胞在96孔板中培养，加入适合的浓度的多糖，利用ISO-83蛋白质染色试剂盒和MTT试剂分别测定巨噬细胞的吞噬作用和细胞增殖能力。
三、结果与讨论
3.1马尾松花粉多糖的分离纯化
按照上述方法，从马尾松花粉中成功分离纯化出一种多糖，并以大豆异黄酮（GEN）作为控制组对其进行比较。结果表明，采用DEAE-52离子交换柱法提取得到的多糖具有较高的纯度和明显的分子量差异，从而实现了对多糖的有效分离和纯化，为后续研究提供了基础。
3.2马尾松花粉多糖的结构表征
采用FT-IR和GC-MS等手段对其进行了结构表征。根据FT-IR光谱图的峰位、强度等特征，初步确定了该多糖的结构式为β型-D-苷聚糖。GC-MS也进一步鉴定了该多糖的有机质成分。
3.3马尾松花粉多糖的活性研究
将多糖加到巨噬细胞RAW264.7中，发现其能显著地促进细胞周期的进行，并能提升吞噬能力。这提示该多糖可能具有免疫调节、抗病毒、抗癌等生物活性，具有一定的实用价值。
四、结论
本文成功分离纯化了马尾松花粉中的多糖，采用FT-IR和GC-MS等方法对其进行了结构表征，并对其活性进行了研究。结果表明，马尾松花粉多糖具有一定的生物活性和潜在作用，为其开发利用提供了初步的理论和实践依据。