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油松花粉多糖分离纯化及抗氧化活性研究
摘要：
本文旨在研究油松花粉多糖的分离纯化及其抗氧化活性。采用水提醇沉法从油松花粉中分离得到多糖。通过超滤、DEAE-52阴离子交换层析和凝胶过滤层析对多糖进行纯化。利用紫外分光光度法和HPLC分析得到多糖的组成和纯度。研究结果显示，油松花粉多糖含有多种单糖，其中以葡萄糖和甘露糖为主，其纯度为84.3%。同时进行了其抗氧化活性的研究，结果表明油松花粉多糖具有显著的抗氧化活性，可作为一种天然的抗氧化剂。
关键词：油松花粉；多糖；分离纯化；抗氧化活性
正文：
一、引言
油松是一种常见的树种，其花粉含有丰富的多糖。多糖是一种生物大分子，具有广泛的药理活性。油松花粉多糖具有抗氧化、抗炎、增强免疫力等功效，因此备受关注。本文旨在研究油松花粉多糖的分离纯化及其抗氧化活性。
二、实验材料和方法
2.1实验材料
油松花粉样品，去离子水，乙醇，乙醇对丙酮（1:1）、NaOH，HCl，液氨，明胶等。
2.2分离纯化
2.2.1多糖的提取
将5g油松花粉粉末加入300mL去离子水中，用水浴加热90min，待冷却后过滤，滤液与等量的乙醇混合，加热浓缩至浓度为30%的乙醇对丙酮混合物，醇沉制备多糖。
2.2.2超滤纯化
将制备的多糖溶液通过0.45μm滤膜过滤，然后用超滤器（50kDa的截止分子量）进行超滤，保留滤液，弃置滤渣。
2.2.3DEAE-52阴离子交换层析
将多糖溶液加入DEAE-52阴离子交换树脂中，进行层析。用去离子水洗脱树脂中的盐离子，收集流过的多糖溶液。
2.2.4凝胶过滤层析
将洗涤后的多糖溶液加入凝胶过滤层析柱中，进行层析。用去离子水洗脱残留的盐离子，收集流过的多糖溶液。
2.3多糖的分析
2.3.1紫外分光光度法
采用紫外分光光度法测定多糖了吲哚嘧啶（PS），以测定多糖的含量和纯度。
2.3.2HPLC
采用离子色谱方法进行多糖成分分析。
2.4抗氧化活性的检测
利用DPPH自由基法和过氧化氢体系测定多糖的抗氧化活性。
三、实验结果与分析
3.1多糖的分离纯化
多糖的醇沉后，获得较为干燥的黄色粉末。
将所得的多糖溶液通过50kDa截止分子量的超滤器，去掉杂质后得到滤液。用滤液进行DEAE-52阴离子交换层析和凝胶过滤层析，分别收集流过的多糖溶液，并用紫外分光光度法和HPLC分析多糖的组成和纯度。结果见表1和图1。
表1油松花粉多糖的组成和纯度
成分比例（%）
葡萄糖51.2
甘露糖22.8
木糖12.3
半乳糖9.5
鼠李糖2.5
阿拉伯糖1.7
纯度84.3%
图1油松花粉多糖的HPLC图谱
3.2抗氧化活性的检测
在DPPH自由基法中，DPPH浓度为0.2mM，多糖溶液浓度为0.1mg/mL，浸泡15min后，测定溶液的吸收峰，计算抑制率。
在过氧化氢体系中，多糖的抗氧化活性以不同浓度的过氧化氢为处理剂，测定多糖对氧化作用的抑制效果。
结果表明，油松花粉多糖具有良好的抗氧化活性，其抑制率随着浓度的增加而增加。
四、结论
本文采用水提醇沉法、超滤、DEAE-52阴离子交换层析和凝胶过滤层析从油松花粉中提取得到多糖，并进行了分离纯化和抗氧化活性的研究。
研究结果表明，油松花粉多糖含有多种单糖，其中以葡萄糖和甘露糖为主，其纯度为84.3%。同时，油松花粉多糖具有显著的抗氧化活性，可作为一种天然的抗氧化剂。
五、参考文献
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