电子显微镜样品制备与观察电子显微镜样品制备[1].ppt

电子显微镜样品制备与观察-电子显微镜样品制备主要内容一、样品的取材与固定（四）实验方法
1动物麻醉将小白鼠放入烧杯，放入一蘸有氯仿的脱脂棉球，用培养皿盖住烧杯口，约3～5min后小白鼠被麻醉；
2解剖分割迅速解剖，取出肝脏，在硬纸上用新单面刀片分割成0.5*0.5*0.5mm3小块，迅速投入准备号的固定液；
3前固定2.5%戊二醛0~4℃固定1~2h（固定液需提前准备号）；
4漂洗0.1M磷酸缓冲液漂洗3次，每次5～10min,0～4℃；5后固定1％鋨酸固定1～2h，0～4℃；
6漂洗0.1M磷酸缓冲液漂洗3次，每次5～10min,0～4℃；
7脱水30％乙醇→50％乙醇→70％乙醇，0～4℃，每步5～10min；
8保存70％乙醇0～4℃保存。（五）实验要求
1用具干燥；
2取材快、准、小、轻；
3鋨酸有毒，需在通风厨中进行，含鋨酸的废液放入指定容器；
4每人固定2～3块样品；
5在固定的过程中要不断震动样品管。二、样品的渗透与包埋（四）实验方法
1脱水85％乙醇→95％乙醇→100％乙醇→100％乙醇，每步5~10min；
2置换丙酮→丙酮，每步5~10min；
3渗透1/2丙酮+1/2环氧树脂1~4h；
4包埋先将包埋模块加满环氧树脂，再将渗透过的材料用牙签挑到包埋模块尖端部分，并在其中渗透3~4h；
5聚合加热37℃→45℃→60℃，各12h。（五）实验要求
1所用器具、工具保持清洁干燥；
2手上若沾有环氧树脂，用丙酮棉球擦去；
每人包埋2～3个样品块。三、修快与支持膜的制备（四）实验方法
1修快
（1）用样品夹头夹住环氧树脂包埋块的2/3左右，夹紧，或用手拿住样品块；
（2）用小钢锉或单面刀片修快使达到下面要求：切面光滑平整，尽可能是要观察的材料，切面大小0.5*0.5mm2；3～4个斜面的坡度以45度为宜。
2支持膜的制备
（1）将玻璃条、250ml烧杯洗净，玻璃条先用纱布擦干，然后再用绸布用力反复擦净，250ml烧杯装满蒸馏水；
（2）将玻璃条放入0.2~0.3%聚乙烯醇缩甲醛的氯仿溶液中2~4cm深，停留3~5s后提出，在空气中自然干燥；
（3）在玻璃条四周用单面刀片将膜轻轻划开，然后以与水面30度角缓慢插入放在日光灯正下方的250ml烧杯的蒸馏水中，同时用眼观察(使眼正好能看到水面反射的日光灯的光线)，使膜完全脱离玻璃条而漂浮在水面上，膜应为均匀的灰色（约15nm）；（4）将2～4片载网放在膜上，再用镊子轻压1～2下，使载网与膜紧贴；
（5）再用比膜稍大的滤纸放在膜的上方，轻压下滤纸一角，在滤纸刚好全部湿润之际将滤纸提起，载网与膜亦贴在滤纸上；
（6）将膜向上保存于培养皿中备用。
（五）实验要求
1制膜所用的器具、蒸馏水、纱布、绸布必须干净，用后洗净，制膜过程要防尘；
2每人修快2块，制膜2张，将修好的样品块用纸包好写上组号姓名；
3预习下次实验。
四、玻璃刀的制作与超薄切片五、电子染色六、电子显微镜的使用与样品超微结构观察4加灯丝电源：顺时针旋转至限位处（加灯丝电源必须有高压存在），此时应看到图象，若不能看到图象，请与专职人员联系，切勿随意调整各旋钮。5观察:调整放大倍数、亮度、样品XY平移、焦距进行观察。
6照相：将要照相部位移至视野中心标记方框内，过卷，调整焦距、亮度至自动曝光两个绿灯同时亮，抬起荧光屏进行曝光。
7关机：将放大倍数调至1000X，调整亮度正好充满荧光屏，取出样品，灯丝旋钮调至最低，高压调至OFF，压下关闭按钮，约5分钟后仪器关闭，切断两个稳压电源开关。
8记录：包括使用起至时间、观察内容、使用人及所属单位及导师，仪器工作情况。演讲完毕，谢谢听讲!