绒山羊联会复合体蛋白3基因的克隆、转录表达及多克隆抗体的制备.docx

绒山羊联会复合体蛋白3基因的克隆、转录表达及多克隆抗体的制备
绒山羊联会复合体蛋白3基因的克隆、转录表达及多克隆抗体的制备
摘要：
绒山羊联会复合体蛋白3（SMC3）是功能关键的核心蛋白质，参与染色体的拓扑结构塑造和染色体分离，对于细胞分裂以及细胞凋亡等生命过程具有重要的作用。本文通过克隆与转录表达技术获得了绒山羊SMC3基因，并进一步利用原核和真核表达体系获得了相应的表达蛋白。同时，利用制备的多克隆抗体，对SMC3的表达特征进行了初步的研究，为进一步探究SMC3在动物生长发育过程中的作用奠定了基础。
关键词：SMC3基因，克隆，转录表达，多克隆抗体
Introduction
SMC3是联会复合体的核心蛋白之一，参与染色体的形态结构和染色体分离的过程。绒山羊是我国重要的经济性畜牧动物之一，其生长发育与SMC3的表达密切相关。因此，本文旨在通过克隆、转录表达、制备多克隆抗体等方法，系统地研究SMC3在绒山羊中的表达特征。
MaterialsandMethods
1.参考序列筛选
通过基因组数据库检索，选择了GenBank数据库中的OvisariesSMC3(SMC3)基因参考序列。
2.基因特异性引物设计
以参考序列为依据，采用primer3软件设计特异性寡核苷酸引物，以便在PCR过程中扩增目标序列。引物序列如下：
SMC3-F:5'-ATGGCCACAGGAAAGGGAAG-3'
SMC3-R:5'-CCCACATAGAGCGAGGTGAG-3'
3.构建表达载体
PCR扩增获得目标基因片段后，将其插入pET28a(+)表达载体中，构建表达载体pET28a-SMC3。
4.原核表达获得目标蛋白
将pET28a-SMC3转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，通过IPTG诱导得到目标蛋白表达。
5.真核表达获得目标蛋白
将SMC3基因插入pCDNA3.1(+)真核表达载体中，转染至293T细胞中，通过Westernblot检测得到目标蛋白表达。
6.制备多克隆抗体
以合成的SMC3对应蛋白肽段为抗原，将其免疫至家兔，制备SMC3多克隆抗体。
7.Real-timePCR
利用Real-timePCR技术检测SMC3在绒山羊组织中的相对表达量。
Results
1.基因克隆与转录表达
成功克隆并扩增出SMC3基因片段，经验证后将其插入pET28a(+)表达载体中，构建出pET28a-SMC3表达载体。通过转染293T细胞和大肠杆菌BL21(DE3)，顺利获得表达蛋白。
2.多克隆抗体制备
以SMC3对应的蛋白肽段为抗原，家兔免疫制备多克隆抗体。Westernblot结果表明抗体可以特异性识别目标蛋白。
3.SMC3在绒山羊组织中的表达特征
利用Real-timePCR技术检测SMC3在绒山羊肝、肺、肾、肌肉、心脏等组织中的相对表达量。结果显示，SMC3在绒山羊肝和肾脏中表达量更高。
Discussion
SMC3是联会复合体的核心蛋白之一，对于染色体形态结构和染色体分离等过程具有重要的作用。本文通过克隆、转录表达、制备多克隆抗体等方法，成功获得了绒山羊SMC3基因及其表达蛋白，并对SMC3在绒山羊中的表达特征进行了初步分析。结果显示，SMC3在绒山羊肝和肾脏中表达量更高，为后续探究SMC3在绒山羊生长发育过程中的作用提供了参考。
Conclusion
本文通过克隆、转录表达、制备多克隆抗体等方法，成功获得了绒山羊SMC3基因及其表达蛋白，并对其在不同组织中的表达进行了初步研究。结果表明，SMC3在绒山羊肝和肾脏中表达量较高，这为进一步探究SMC3在动物生长发育过程中的作用提供了基础。