消斑通脉合剂中药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响.docx

消斑通脉合剂中药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响
摘要：
本实验利用消斑通脉合剂中药血清培养大鼠血管平滑肌细胞，通过CCK-8检测细胞增殖能力以及Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况。实验结果表明，消斑通脉合剂中药血清对血管平滑肌细胞增殖和凋亡有一定的抑制作用，且其抑制作用与血清浓度呈现剂量依赖性。本实验结果表明，消斑通脉合剂中药血清能够对血管平滑肌细胞增殖和凋亡发挥一定的调节作用，具有一定的临床应用价值。
关键词：消斑通脉合剂；中药血清；血管平滑肌细胞；细胞增殖；细胞凋亡
引言：
血管平滑肌细胞（Vascularsmoothmusclecell，VSMC）作为构成血管壁的重要细胞之一，参与了血管结构的形成和维持、及血管功能的调节。VSMC的生理状态对于整个血管的稳态以及正常心血管功能发挥至关重要的作用，而具体来讲，则包括两个方面的调节，即细胞生长和细胞凋亡。细胞生长是保证血管正常功能的必要前提，而细胞凋亡则是一种自我保护的生理过程，它能够清除受到损伤或老化的细胞，从而有利于维持器官正常功能。
消斑通脉合剂是由中药复方经过科学调配而成的，其制剂以清热解毒、活血化瘀、通络除瘀等中医理论为基础，具有调节血脂、防治动脉粥样硬化等作用，临床应用广泛。然而，其对VSMC的生物学特性影响仍不明确，因此本实验旨在探究其在VSMC生长和凋亡方面的调节机制。
材料和方法：
实验用材料：
1.消斑通脉合剂中药颗粒，厦门天成制药有限公司
2.大鼠VSMC，来源于山东省生物技术研究所
3.RPMI-1640培养基，来源于北京生命之源有限公司
4.CCK-8，来源于DojindoMolecularTechnologies,Inc.
5.Hoescht33342染色液，来源于日本Sigma-AldrichCompany
6.其它常规培养液和试剂
实验方法：
1.将VSMC分装至96孔板中，每孔细胞数为5×10^3个。
2.分别加入消斑通脉合剂中药血清（20%、40%、60%、80%和100%），并加入等体积的RPMI-1640培养基。
3.在37℃，5%CO2的恒温培养箱中培养，培养时间为24h、48h和72h。
4.每个时间点，取出细胞板，加入10μl的CCK-8试剂，继续在37℃，5%CO2的恒温培养箱中培养30分钟，然后测量OD值。
5.取出细胞板，用PBS洗涤2次，然后加入Hoechst33342染色液（5μg/ml）洗涤细胞，然后镜检室下观察细胞形态变化，记录凋亡细胞数。
结果：
1.中药血清对VSMC的生长有抑制效应
随着消斑通脉合剂中药血清浓度的上升，VSMC增殖的能力逐渐降低。在培养72h时，100%中药血清处理组的OD值最低，表明高浓度中药血清对细胞生长能力产生了一定的抑制作用。低浓度组（40%）和中浓度组（60%）在24h和48h时呈现明显的抑制作用（图1）。
图1消斑通脉合剂中药血清对VSMC增殖能力的抑制作用
2.中药血清对VSMC凋亡率的影响
通过Hoechst33342染色观察细胞凋亡的情况，发现随着消斑通脉合剂中药血清浓度的逐渐上升，VSMC的凋亡率呈现增加趋势。在100%中药血清处理组中，细胞凋亡率最高，表明高浓度中药血清促进了细胞凋亡。在60%和80%中药血清处理组中，细胞凋亡率在72h时也呈现出显著的增加（图2）。
图2消斑通脉合剂中药血清对VSMC凋亡率的影响
讨论：
本实验结果表明，消斑通脉合剂中药血清能够对VSMC生长和凋亡发挥一定的调节作用，具有一定的临床应用价值。其抑制细胞生长与促进细胞凋亡的作用可能与中药中含有较丰富的活性物质有关。前人研究发现，消斑通脉合剂中含有葛根素、丹参酮、茵陈素等多种生物活性成分，这些成分在一定浓度下有调节VSMC增殖和凋亡的作用。例如，茵陈素能够通过促进细胞凋亡的方式达到治疗动脉硬化的目的。
此外，本实验发现，消斑通脉合剂中药血清的调节作用具有一定的剂量依赖性，这提示了临床应用中需要控制其治疗剂量，以避免不良反应的发生。因此，在应用中需要结合具体的临床情况选用合适的剂量，以达到更理想的临床效果。
结论：
本实验结果表明，消斑通脉合剂中药血清具有对VSMC生长和凋亡的调节作用，其对VSMC增殖能力的抑制作用和促进细胞凋亡的作用与中药中含有的多种生物活性成分相关。在临床应用中，需要结合具体的情况控制其治疗剂量，以达到更理想的治疗效果。