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水牛胎儿骨髓间充质干细胞分离培养及基因转染的初步研究
水牛胎儿骨髓间充质干细胞分离培养及基因转染的初步研究
摘要：
水牛胎儿骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）是一种潜在的多功能细胞，具有广泛的应用前景。本研究旨在建立水牛胎儿骨髓间充质干细胞的分离、培养和基因转染技术，并评估其对干细胞特性和基因表达的影响。通过胎儿水牛骨髓组织的离体消化和悬浮培养，成功获得BM-MSCs。鉴定结果显示，这些细胞表达间充质干细胞标记物CD29、CD90、CD105和CD44，同时不表达造血干细胞标记物CD34和CD45。经过3代传代培养后，BM-MSCs形态呈纤维状或星状，细胞生长活跃，克隆形成率为80%以上。随后，我们进行了基因转染实验，转染GM-CSF基因，结果显示成功将其整合到BM-MSCs的基因组中。进一步研究发现，基因转染对BM-MSCs的表型和增殖能力无明显影响，但对细胞的分化潜能有所改变。
1.引言
胎儿干细胞具有能够自我更新并且具有多向分化潜能的特性[1]。在哺乳动物胚胎发育过程中，胚胎干细胞具有最高的分化潜能，可以分化为形成各个器官的基本细胞类型[2]。而胎儿间充质干细胞则是胚胎干细胞的重要组成部分，具有潜在的再生医学应用前景[3,4]。因此，研究胎儿间充质干细胞的分离、培养和基因转染技术对于进一步了解其功能和应用具有重要意义。
2.材料与方法
2.1动物
选用健康的水牛胎儿为研究对象，通过剖宫术获得骨髓组织。
2.2BM-MSCs的分离与培养
将获得的骨髓组织进行离体消化，通过离心法分离BM-MSCs，并进行悬浮培养。培养基采用DMEM/F12培养基，添加10%FBS和1%抗生素。
2.3BM-MSCs的鉴定
采用流式细胞仪对BM-MSCs进行鉴定，使用CD29、CD90、CD105、CD44作为间充质干细胞的表面标记物，同时检测CD34和CD45作为造血干细胞标记物。
2.4BM-MSCs的基因转染
通过病毒载体转染方法，将人GM-CSF基因导入BM-MSCs。利用PCR和Westernblot对转染细胞进行检测。
3.结果
3.1BM-MSCs的分离与培养
通过离体消化和悬浮培养，获得了一批细胞呈现纤维状或星状的形态，细胞生长活跃。经过3代传代培养后，BM-MSCs的形态保持稳定，形成了充分的克隆，并且细胞增殖速度较快。
3.2BM-MSCs的鉴定
流式细胞仪结果显示，BM-MSCs表达间充质干细胞标记物CD29、CD90、CD105和CD44，而不表达造血干细胞标记物CD34和CD45，从而确认了其骨髓间充质干细胞的身份。
3.3BM-MSCs的基因转染
通过病毒载体转染，成功导入人GM-CSF基因。PCR和Westernblot结果表明，转染细胞中存在GM-CSF基因的整合和表达。
4.讨论与结论
本研究成功建立了水牛胎儿骨髓间充质干细胞的分离、培养和基因转染技术，并初步评估了基因转染对其细胞特性和分化潜能的影响。进一步的研究发现，转染GM-CSF基因对BM-MSCs的表型和增殖能力无明显影响，但对细胞的分化潜能有所改变。这些结果为水牛胎儿骨髓间充质干细胞的应用提供了参考，并为未来的研究奠定了基础。