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小麦面筋多肽的分离纯化及抗氧化活性测定
摘要
本文旨在研究小麦面筋多肽的分离纯化及抗氧化活性测定。通过超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析等技术，将小麦面筋多肽从小麦面粉中分离纯化出来，并对其分子量分布进行了分析。结果表明，小麦面筋多肽主要分布在3-10kDa的范围内。随后，采用DPPH自由基清除实验、还原力实验与铁离子螯合实验探讨了小麦面筋多肽的抗氧化活性。结果显示，小麦面筋多肽具有明显的抗氧化能力，且其抗氧化活性与其分子量呈正相关。以上研究结果为开发小麦面筋多肽的功能性食品提供了理论基础。
关键词：小麦面筋多肽；分离纯化；抗氧化活性
Abstract
Theaimofthisstudywastoinvestigatetheseparationandpurificationofwheatglutenpeptidesandtodeterminetheirantioxidantactivity.Throughtechniquessuchasultrafiltration,ionexchangechromatography,andgelfiltrationchromatography,wheatglutenpeptideswereisolatedandpurifiedfromwheatflour,andthemolecularweightdistributionwasanalyzed.Theresultsshowedthatwheatglutenpeptidesweremainlydistributedintherangeof3-10kDa.Subsequently,theantioxidantactivityofwheatglutenpeptideswasexploredthroughDPPHfreeradicalscavengingassay,reductionpowerassay,andironionchelationassay.Theresultsshowedthatwheatglutenpeptideshadsignificantantioxidantcapabilities,andtheirantioxidantactivitywaspositivelycorrelatedwiththeirmolecularweight.Theseresearchresultsprovideatheoreticalbasisforthedevelopmentoffunctionalfoodwithwheatglutenpeptides.
Keywords:wheatglutenpeptides;separationandpurification;antioxidantactivity
1.引言
近年来，小麦面筋多肽作为一类具有生物活性的多肽愈发受到人们的关注。小麦面筋多肽是一类由小麦面筋酸(由半胱氨酸、丝氨酸和赖氨酸等氨基酸组成)水解而成的多肽，主要由寡肽和小多肽组成，分子量轻，易被人体吸收。研究表明，小麦面筋多肽具有多种生理活性，如抗糖尿病、降血压、降胆固醇、增强免疫等，同时还具有抗氧化能力，能有效清除自由基。
然而，小麦面筋多肽的自身特性导致其存在于小麦面粉之中，难以直接应用于功能性食品的开发。因此，如何从小麦面粉中高效地分离纯化小麦面筋多肽，成为当前研究的热点之一。本文采用超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析等技术分离纯化小麦面筋多肽，并探讨了其抗氧化活性。
2.实验材料与方法
2.1实验材料
小麦面粉、酶解酶(动物源)、DEAE-52树脂、SephadexG-25树脂、DPPH、EDTA、FeSO4等。
2.2实验方法
2.2.1小麦面筋多肽的制备
将小麦面粉加入去离子水中制成15%的小麦面粉悬浮液，加入酶解酶，温和地水解2h，然后将液体放在80℃下煮沸10min，使酶解酶失活，过滤去除沉淀，放入超滤器中，通过超滤去除大分子杂质，得到小麦面筋多肽粗提物。
2.2.2小麦面筋多肽的纯化
将得到的小麦面筋多肽粗提物加入DEAE-52树脂预平衡的离子交换柱中，在逐渐增加NaCl浓度的条件下进行洗脱，得到NaCl浓度为0.5M的小麦面筋多肽纯化物。随后，将得到的小麦面筋多肽纯化物分别通过SephadexG-25树脂的凝胶过滤柱进行纯化，得到小麦面筋多肽。
2.2.3小麦面筋多肽的分子量分布分析
采用SephacrylS-200HR凝胶过滤柱分析小麦面筋多肽的分子量分布。
2.2.4小麦面筋多肽的抗氧化活性测定
2.2.4.1DPPH自由基清除实验
将小麦面筋多肽与DPPH混合，在30min内测定其吸光度。DPPH溶液的吸光度作为对照组，去除小麦面筋多肽溶液的吸光度与DPPH溶液的吸光度之差即为小麦面筋多肽清除DPPH自由基的能力。
2.2.4