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小鼠角膜上皮细胞的长期培养及组织工程化角膜上皮构建
小鼠角膜上皮细胞的长期培养及组织工程化角膜上皮构建
摘要：角膜上皮是视觉系统的重要组成部分。随着科技的不断发展，组织工程化技术在角膜上皮构建方面的应用越来越广泛。本文主要介绍小鼠角膜上皮细胞的长期培养和组织工程化角膜上皮的构建方法。
关键词：小鼠角膜上皮细胞；长期培养；组织工程化构建；角膜上皮
1.引言
角膜上皮是由一层多角形的细胞构成的，是眼球表面的一种免疫保护屏障，具有保护眼球和维持视觉清晰度的重要作用。由于外界环境的不断污染和摩擦，导致角膜上皮受损和疾病的发生。因此，探究角膜上皮的细胞生长、分化和再生机制，以及寻找角膜组织替代品的构建方法，是眼科学领域的热门研究方向。
目前，组织工程化技术在构建人工角膜方面具有巨大的潜力。对于小鼠角膜上皮的长期培养和组织工程化角膜上皮的构建方法，已经有了多种成熟的实验方法和技术。
2.小鼠角膜上皮细胞的长期培养
小鼠角膜上皮细胞的长期培养是构建组织工程化角膜上皮的前提条件，也是研究小鼠角膜细胞生长、分化和再生机制的基础。
2.1小鼠角膜切片培养法
小鼠角膜切片培养法是将小鼠眼球摘出后，沿着角膜的中心轴向切出一片角膜切片，用培养基培养3天，使角膜上皮细胞从切片上生长出来。但是，此方法存在分离率低、污染率高、角膜上皮细胞易出现失活和红细胞污染等缺点。
2.2酶消化法
酶消化法是将小鼠眼球取出后，通过消化酶的作用分离出角膜上皮细胞。需要注意的是，消化酶的浓度和消化时间应掌握得当，以避免对角膜上皮细胞造成损伤。
2.3鼠角膜上皮细胞系
自从1999年美国涌现出了一个世界级的细胞生物学家詹姆斯·汤普森·里托(JamesThomsonLitt)用人的胚胎干细胞成功地培育出由胚胎干细胞能分化为成很多不同的细胞，如心肌细胞、神经细胞等等，不过最近美国又出现了一个逆转录酶，他发现如果将老鼠的尾巴拍打两次就可以得到回退细胞，这种回退细胞可以培育出各类细胞系，如产生胰岛素制造细胞系，神经细胞系，心脏细胞系等等15个细胞系。
3.组织工程化角膜上皮的构建
组织工程化角膜上皮的构建是利用细胞培养技术，将外源原代或细胞系细胞成纱线状、膜状、片状等组织后，接种在相应的带细胞外基质支架的载体上，进行体外培养，待组织成熟后，将其转移到患者角膜上。
3.1注射法
注射法是一种将角膜上皮细胞和载体直接注射到眼球中，可以快速恢复眼表结构和功能。但是，注射法存在角膜上皮细胞分布不均，难以控制等缺点。
3.2带细胞外基质支架的载体法
带细胞外基质支架的载体法是利用细胞生物学、材料学和工程学的知识，将角膜上皮细胞和带有合适的细胞外基质支架的载体封装在一起，通过体外培养等方法使其生长成细胞构建物，再种植到患者眼部。这种方法能够控制角膜上皮细胞在载体上的定向生长，具有成本低、效果好、应用范围广等优点。
3.3无细胞基质构建方法
无细胞基质构建方法包括自组织法和微纳米技术。自组织法通过调控细胞外基质的生物化学反应，发掘细胞自组织机制，构建出结构化的组织。微纳米技术通过利用微纳米尺度的器械，精确控制材料、细胞和药物的运动、分布、反应过程，使其快速、准确地完成组织构建。这些方法具有构建快、效果好、成本低等优点。
4.结论
小鼠角膜上皮细胞的长期培养和组织工程化构建是角膜上皮重建领域的重要研究方向。未来，随着科学技术的不断发展，对小鼠角膜细胞行为的深入探究和组织工程化角膜上皮构建技术的不断创新，将在眼科治疗领域发挥重要作用。